[发明专利]一种分步酶解羊乳酪蛋白制备ACE抑制肽的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种分步酶解羊乳酪蛋白制备ACE抑制肽的方法。

背景技术

高血压是最常见的心血管疾病之一,常引起心、脑、肾并发症,是脑卒中冠心病的主要危险因素。高血压是指在未使用降压药物的情况下，收缩压≥140mmHg和（或）舒张压≥90mmHg的情形。据国家高血压研究中心最新统计,我国高血压患者已达1.2亿人,发病率为10.8%,其危害程度仅次于肿瘤,已成为危害人类健康的第二号杀手。根据世界卫生组织预测，至2020年，非传染性疾病将占我国死亡原因的79%，其中心血管病将占首位。每降低5mmHg收缩压，患心血管疾病的风险就降低16%。

目前，常用于抗高血压药物治疗的主要有6种降压药物，分别是利尿剂、α-受体拮抗剂、钙通道阻滞剂、血管紧张素转化酶抑制剂、血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂和α-肾上腺素受体阻滞剂。这些降血压药物虽然有显著的降压效果，但却存在一定的毒副作用，如咳嗽、过敏性血管水肿及肾功能不全加重等。

血管紧张素转换酶(angiotensin–eonverting enzyme，ACE)在血压调节中起重要作用,经碳端两个氨基酸(His-Leu)的切除，能够把原本无活性的血管紧张素I转变为具有活性的血管紧张素II，引起血管收缩,使血压上升；ACE还会使具有血管舒张功能的舒缓激肤失活，同样又引起血压上升的情形，ACE抑制肤能够阻断ACE引起的两种生化反应过程,起降血压作用。

ACE的制备方法主要有5种：化学降解法、酶解法、微生物发酵法、化学合成法和基因工程法，现在研究最多的是酶解法和微生物发酵法。相对于微生物发酵法，酶法反应快速，制备ACE抑制肽抑制活性高，且原料广泛，主要有乳类蛋白、植物类蛋白及动物类蛋白，但目前乳源ACE抑制肽主要是以牛乳为原料，对羊乳尚未涉及到。

发明内容

为了克服上述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种分步酶解羊乳酪蛋白制备ACE抑制肽的方法，酪蛋白经过超声波处理，结构发生变化，再通过复合酶解的方法使水解反应更彻底，更迅速。

为了达到上述目的，本发明采取的技术方案为：

一种分布酶解羊乳酪蛋白制备ACE抑制肽的方法，包括以下步骤：

步骤1：将复原羊乳冷却到4℃，使用高速离心机在6400rpm下离心15min后，除去脂肪，得到脱脂乳；

步骤2：将所得脱脂乳在35-75℃范围内的恒温水浴箱中进行保温，采用磁力加热搅拌器进行搅拌，搅拌速度为0-1600rpm，边搅拌边滴加HCl溶液，使脱脂乳溶液的pH值为4.2-5.0，再使用高速离心机在6400rpm下离心15min将酪蛋白进行沉淀，弃去上清液，将沉淀的酪蛋白进行冷冻干燥，在温度为-40℃下预冻12h，再转移到冷冻干燥机在-55℃下冷冻干燥24h，得到酪蛋白冻干粉，测定酪蛋白得率；

步骤3：将所得酪蛋白冻干粉与纯净水混合，制成质量浓度为10%的酪蛋白溶液，用180w的超声波预处理60min；

步骤4：从所得酪蛋白溶液中取出100ml，在45-65℃的恒温水浴箱中进行保温，滴入1mol/l的NaOH溶液，使酪蛋白溶液的pH值为6.5-8.5；按照酶与底物质量比为2-10:100的比例，加入碱性酶Alcalase，水解1-3h时；水解过程中，每间隔0.5h取5ml水解液，在90℃的恒温水浴箱中保持10min，使碱性酶Alcalase失活，然后使用高速离心机在9000rpm的条件下离心20min，除去未水解的酪蛋白，收集上清液并采用紫外分光光度法测定ACE抑制活性；

步骤5：将所得上清液吸取50ml，在35-55℃的恒温水浴箱中进行保温，滴入1mol/l的NaOH溶液，使该溶液的pH值为7.0-9.0，再分别加入质量比为1:1、1:2、2:1、4:1的中性蛋白酶和胰蛋白酶，所用的酶与底物质量比为2-10：100，水解5h；水解过程中，每间隔1h取5ml水解液，在90℃的恒温水浴箱中保持10min，使碱性酶Alcalase失活，使用高速离心机在9000rpm的条件下离心20min，除去未水解的酪蛋白，收集上清液并采用紫外分光光度法测定ACE抑制活性，并对上清液进行冷冻干燥，得到ACE抑制肽。

所述复原羊乳为羊奶粉与纯净水按照质量比例1:9进行混合溶解所得到的溶液。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：