[发明专利]多倍体积雪草品种及其培育方法

权利要求书

1.多倍体积雪草品种培育方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）从二倍体积雪草种质资源中筛选出优良积雪草植株；

2）选取优良积雪草成年植株的顶芽，经预处理后按常规分化培养基诱导产生不定芽和愈伤组织，然后转接到常规增殖培养基进行继代培养；

3）将步骤2）中生长势强的组培继代苗或是分生能力强的愈伤组织暗培养5天后，以氨磺灵为诱变剂，采用液体或固体混培法，诱变积雪草组培继代苗或愈伤组织产生染色体基因组倍数性变化，转入常规分化培养基中进行光照培养，获得丛生芽，分株后转入生根培养基中培养成根茎叶完整的组培苗；

4）将步骤3）获得的根茎叶完整的组培苗与二倍体组培苗对照，将叶片大小、颜色有明显变化的植株选为基因组可能加倍的候选植株；

5）剪取步骤4）中的候选植株的分生组织，进行染色体倍性鉴定，选取染色体数目2n=4x=36的幼苗，将其炼苗、种植成活，即获得四倍体积雪草品种。

2.根据权利要求1所述的培育方法，其特征在于，还包括以下步骤：

6）将四倍体积雪草和二倍体积雪草人工授粉杂交，得到杂交积雪草种子；

7）将杂交种子繁育成完整植株种植，再对其分生组织进行染色体数目检测，筛选获得三倍体积雪草品种。

3.根据权利要求1或2所述的培育方法，其特征在于：步骤1）中，作为原始亲本的优良积雪草植株是指：从染色体核型指数为2n=18的野生积雪草中选择具有茎段节间长、茎粗、叶片大且厚实、有效成分含量高的成年植株。

4.根据权利要求1或2所述的培育方法，其特征在于：步骤3）所述诱变方法是：固体混培法是指在无菌条件下将生长势强的组培继代苗或是分生能力强的愈伤组织暗培养5-7天，然后转接到添加有10-12μmol.L-1氨磺灵溶液MS固体培养基中在5-10℃低温下暗培养2-5d，再转入不含氨磺灵溶液常规分化培养基中进行光照培养；液体法是指在无菌条件下先用保水性好的材料覆盖住继代苗顶芽或愈伤组织，然后滴入过滤灭菌的8-10μmol.L-1氨磺灵溶液将棉花完全浸湿后在5-10℃低温下暗培养10-12小时，无菌水洗净，转入不含氨磺灵溶液的常规分化培养基中光照培养。 

5.根据权利要求1或2所述的培育方法，其特征在于： 步骤3）所述的光照培养是每天光照10小时，光照强度为1000-2000lx，培养温度为25℃；

步骤3）所述的生根培养是：培养基为1/2MS+NAA0.3mg/L+IAA0.3mg/L，培养条件为暗培养7d后进行光照培养，光照强度为1000-2000lx，培养时间为10h∕d，培养温度是25℃。

6.根据权利要求1或2所述的培育方法，其特征在于：步骤5）所述的染色体倍性鉴定方法是：剪取目标株幼嫩根尖0.5cm，清水浸泡，经过无水乙醇：冰乙酸=3：1的卡诺固定液固定15min以上，清水冲洗15min, 浓盐酸：甲醇=1：1的解离液解离2-30min，清水冲洗15min，切取根尖0.1mm，用卡宝品红染色液染色，压片观察统计根尖染色体。

7.根据权利要求2所述的培育方法，其特征在于：步骤6）所述的三倍体杂交积雪草种子为：♀4N×♂2N或♂4N×♀2N→F1为3x。

8.多倍体积雪草品种，其特征在于，该多倍体积雪草品种为权利要求1所述的培育方法培育的四倍体积雪草品种，或者为权利要求2所述的培育方法培育的三倍体积雪草品种。