[发明专利]一种稳定的长效rhIL2-HSA融合蛋白液体制剂

说明书

技术领域

本发明涉及一种稳定的rhIL2-HSA融合蛋白液体制剂，它包括缓冲剂、稳定剂和rhIL2-HSA融合蛋白，用于长时间保存rhIL2-HSA融合蛋白。

背景技术

白细胞介素2(Interleukin-2，IL-2)属于白介素家族成员之一。1976年Morgan等人在小鼠脾细胞培养上清液中发现了一种能够促进及维持淋巴T细胞在体外长期生长的因子(当时被称为T细胞生长因子)。1979年国际淋巴因子会议(International Lymphokine Workshop)正式将其命名为IL-2。IL-2是辅助T细胞分泌的淋巴因子，在免疫系统中发挥着极其重要的作用，它能促进T细胞，NK细胞，B细胞的分化、成熟及激活其生物活性，诱导淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)活性，还能促进许多淋巴因子如干扰素，肿瘤坏死因子等的合成与释放以及抗体生成。它还具有发动、促进和广泛上调免疫系统的作用。因此IL2能大大增强机体免疫功能，对于在介导抗病毒CD8+的作用也十分显著。

1992年美国Chiron公司开发的重组人IL-2(Aldesleukin，阿地白介素)作为第一个白介素家族成员药物被美国FDA批准上市(商品名：Proleukin，普留净)，用于肿瘤辅助治疗和癌性胸、腹水的治疗。国内的重组人IL2制剂也在1995年前后被SFDA批准上市。此外，临床研究还发现其在治疗肺癌、白血病、乳腺癌、直肠癌等方面也有较好的疗效。目前国内也有多家药厂生产rIL-2注射液药物，规格有5万、10万、20万、50万、100万、200万IU/瓶。rIL-2注射液药物一般通过静脉滴注、皮下注射、胸腹腔注射和肿瘤灶局部给药的方式使用。

IL-2使用的回顾性调查发现只有大剂量或超剂量给药才能显著改善治疗效果。IL-2治疗学的关键是维持患者相对高的稳态血药浓度，而天然或基因工程重组IL-2产品稳定性差、生物利用度低，半衰期较短(仅为6.9min)，难以达到体内稳定的药效学治疗浓度。为此，我们采用白蛋白融合技术(albumin fusion technology)，构建了IL2-HSA融合蛋白，制备得到了长效IL2类似物。药动力学研究表该长效IL2类似物能够大大延长IL-2在体内的半衰期。由于rhIL2-HSA与单体IL-2在理化性质上存在较大的差距，有必要对rhIL2-HSA的液体制剂进行全新开发，以实现rhIL2-HSA的药物化。

和所有蛋白质药物一样，rhIL2-HSA融合蛋白在应用中必须克服由于蛋白质不稳定性可能导致的活性丧失。药物制剂中影响蛋白类药物药效的因素包括：变性、可溶及不可溶多聚体的形成、水解、生成亚胺、氧化、外消旋和脱酞胺等。这些可能导致蛋白质类药物活性丧失或降低，同时也可引入一些潜在的不良副作用。

因此，需要适当的选择稳定剂以增强rhIL2-HSA融合蛋白的稳定性，减小变性、可溶及不可溶多聚体、水解、生成亚胺、氧化、外消旋和脱酞胺等的发生，从而提高rhIL2-HSA融合蛋白的药物利用度。

发明内容

本发明的目的是提供一种稳定的rhIL2-HSA融合蛋白液体制剂配方。在该液体制剂配方下，rhIL2-HSA融合蛋白的有效期达12个月以上。此外，该液体制剂配方不含任何保护剂和防腐剂。所述液体制剂配方包含缓冲剂，如磷酸盐或醋酸盐缓冲剂，优选醋酸盐缓冲剂，更优选醋酸钠-醋酸钠缓冲体系。所述液体制剂配方还包含0～0.9wt.％NaCl，优选0.8wt.％NaCl。液体制剂的pH在生理上适宜的pH下，优选在5.0～6.5范围内，更优选pH为5.0。得到优选的制剂配方为(wt/wt)

与现有的蛋白质类药物制剂技相比，该制剂配方具有成分简单，稳定性好，配方中不添加人血清白蛋白，避免了因血液污染导致的病毒传播的问题。

具体实施方式

实施例1.规格10万IU/瓶试验

称取乙酸钠0.57g，乙酸0.18g和NaCl8g，用注射用水定容置于1L，用作配置rhIL2-HSA融合蛋白制剂的稀释液。将rhIL2-HSA融合蛋白按效价计算与稀释液配制成10万IU/瓶的rhIL2-HSA，0.22μm膜过滤除菌后，分装成1mL/瓶，压盖后保存。

制剂在低温(2～8℃)贮存，进行稳定性试验(表1)。

实施例2.规格100万IU/瓶试验