[发明专利]一种改良的同时定量检测多个细胞因子的抗体芯片试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，涉及一种同时定量检测多个细胞因子的抗体芯片试剂盒。

技术背景

细胞因子（cytokines）是机体的免疫细胞和非免疫细胞合成和分泌的具有调节多种细胞生理功能的小分子的多肽(低分子蛋白质)。

细胞因子具有非常广泛的生物学活性，包括促进靶细胞的增殖和分化，增强抗感染和细胞杀伤效应，促进或抑制其它细胞因子和膜表面分子的表达，促进炎症过程，影响细胞代谢等。与免疫有关的细胞因子主要包括淋巴细胞产生的淋巴因子、单核巨噬细胞产生的单核因子、白细胞介素(interleukin，IL)、干扰素(interferon，IFN)、集落刺激因子(colony stimulating factor，CSF)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF)、趋化因子(chemokine)、转化生长因子β（transforming growth factorβ，TGFβ）等，它们在免疫系统中起着非常重要的调控作用，在异常情况下也会导致免疫病理反应。

细胞因子都是通过与靶细胞表面的细胞因子受体特异结合后才能发挥其生物学效应，这些效应包括促进靶细胞的增殖和分化，增强抗感染和杀肿瘤细胞效应，促进或抑制其他细胞因子的合成，促进炎症过程，影响细胞代谢等。细胞因子的这些作用具有网络性的特点，即每种细胞因子可作用于多种细胞；每种细胞可受多种细胞因子的调节；不同细胞因子之间具有相互协同或相互制约的作用，由此构成了复杂的细胞因子免疫调节网络。

细胞因子研究具有非常重要的理论和实用意义，它有助于阐明分子水平的免疫调节机理，有助于疾病的预防、诊断和治疗。

目前常用的细胞因子的检测方法主要包括：酶联免疫吸附法（ELISA），放射免疫分析（radio immunoassay，RIA），免疫印迹法（western blot），流式细胞仪（Flow-Cytometry）等。其中，酶联免疫吸附法是最普遍的方法，具灵敏度高、特异性较好、操作简便等优点。但一次试验只能检测单一指标，通量低、成本高，在具有多指标特性的细胞因子检测中，该方法存在明显的不足；放射免疫分析（RIA）虽然灵敏度高，是由于具有放射性污染，现在已很少采用；免疫印迹法能测定分子的大小，且无非特异的反应，但操作繁琐，灵敏度低，且只能检测单一指标，不适合运用于细胞因子的检测；流式细胞仪能在细胞水平上检测细胞因子的水平，但却存在低灵敏、低通量、高成本等缺点。

在细胞因子的多重ELISA检测上，常用的方法包括液相磁珠法(LUMINEX)和96-孔ELISA板法。液相磁珠法(LUMINEX)是把不同的捕获抗体固定在有不同荧光波长的磁珠上，不同的磁珠在同一液相完成反应后流经一检测小管并由两个不同的荧光检测仪来读数。其中的一个读不同的磁珠信号用以代表不同的检测因子，另一个则读该磁珠上的检测信号用以代表该因子的浓度。因为固定有不同捕获抗体的磁珠在同一反应体系中进行，捕获抗体彼此之间就有交叉干扰，以至于同时检测因子的数目有限。另外一个常用的方法是把不同的捕获抗体以微阵列的方式固定在96-孔酶标板底，然后通过类似ELISA的操作来达到多因子的联合检测。但由于96孔酶标板受孔径大小限制，在一个孔内点的数目有限。另外由于96孔酶标板有很强的自身荧光，所以检测通常只能用化学发光法。由于化学发光法信号的弥散特性以至于检测的数目受到进一步的限制。用以上两类多因子联合检测的方法一次最多只能检测几个因子，并且检测结果的重复性也差。

有鉴于此，有必要开发一种新型的多细胞因子定量检测试剂盒，以克服现有技术中亟待解决的问题，实现多细胞因子的高通量、高灵敏度、高特异性和低成本检测。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种改良的同时定量检测多个细胞因子的体芯片试剂盒，该试剂盒采用荧光检测信号，能够同时定量检测几十项细胞因子，克服了现有技术操作繁琐、检测指标单一、灵敏度低等缺陷，具有低成本、便利、高通量、高灵敏度、高特异性、标本用量少、能在普通实验室推广和规模化等优点。