[发明专利]用于鉴别乳腺肌上皮病变的多重染色试剂及其检测方法

权利要求书

1.用于鉴别乳腺肌上皮病变的多重染色试剂，其特征在于该多重染色试剂由以下重量份的抗体组成：鼠抗人CK8/18 免疫组化单克隆抗体20%、即用型钙调节蛋白鼠抗人单克隆抗体20%、即用型细胞角蛋白鼠抗人单克隆抗体20%、即用型P63蛋白鼠抗人单克隆抗体20%、肌动蛋白HHF-35鼠抗人单克隆抗体20%，其制作方法是分别等量吸取上述各组分抗体，然后进行混合，在旋涡混合器上旋转混匀或者吸管吹打混匀即可，并置4℃冰箱内保存备用。

2.用于鉴别乳腺肌上皮病变的检测方法，其特征在于包括以下步骤：步骤一、把采集的乳腺肌上皮组织经过脱水、透明及浸蜡后，进行石蜡包埋后，进行切片，厚度为3-5um，对疑有病变的组织选作免疫标记，在温度为58℃-60℃下，放到恒温箱内烤切片2-3小时，切片上的石蜡经过脱蜡、水化后，用TBS液冲洗切片3次，每次3分钟；步骤二、将切片经内源性过氧化物酶阻断，用浓度为3%的新鲜配制的过氧化氢孵育切片5分钟，然后用蒸馏水冲洗切片2次，每次3分钟；步骤三、用EDTA修复液对切片进行抗原修复；步骤四、向切片加非免疫动物血清，室温下孵育切片10分钟；步骤五、除去切片上的非免疫动物血清，向切片加多重染色试剂，在17℃—33℃温度下孵育切片30-60分钟；步骤六、加使MACH 2 Double Stain酶标二抗试剂，室温孵育切片30分钟，用TBS液冲洗切片3次，每次3分钟，再用蒸馏水冲洗2次，每次3分钟；步骤七、除去切片上的蒸馏水后，加AP-red显色剂室温孵育切片10-20分钟，用蒸馏水冲洗2次，每次3分钟，在显微镜下观察，掌握染色时间，阳性信号为红色，观察完成后，用TBS液冲洗切片3次，每次3分钟，再用蒸馏水冲洗2次，每次3分钟，然后采用pH值为2.0，浓度为0.05% HCl室温孵育切片30 分钟，用TBS液冲洗切片2次，每次3分钟；步骤八、加DAB显色剂室温孵育切片5分钟后，用蒸馏水冲洗切片2次，每次3分钟，在显微镜下观察，掌握染色时间，阳性信号为黄色或者棕黄色，观察完毕后，用蒸馏水冲洗切片3次，每次3分钟；步骤九、除去切片上的蒸馏水，加苏木精浅染30-60秒后，用蒸馏水冲洗2次，每次3分钟；步骤十、除去切片上的蒸馏水，在切片未干时，直接滴加水性封片剂封片，60℃烘干15-30分钟，水性封片剂干燥后，待自然冷却，再用中性树胶封片即可。

3.根据权利要求2所述的用于鉴别乳腺肌上皮病变的检测方法，其特征在于在步骤一中所述石蜡的熔点小于60℃。

4.根据权利要求2所述的用于鉴别乳腺肌上皮病变的检测方法，其特征在于在步骤三中所述EDTA修复液为在100℃温度下煮沸20 分钟，其pH为8.0。

5.根据权利要求2所述的用于鉴别乳腺肌上皮病变的检测方法，其特征在于在步骤七中所述AP-red显色剂为现用现配。