[发明专利]一种双通道环境雌激素免疫传感器的制备方法及应用

权利要求书

1.一种双通道环境雌激素免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）氨基化介孔四氧化三铁（AFMFe₃O₄）的制备

1 g FeCl₃·6H₂O溶解于15~18 mL乙二醇，与3 g NaAc和10 mL乙二胺混合均匀，强烈搅拌20~30 min，装入聚四氟乙烯的反应釜中，于180~200 ℃加热8~ 9 h，取出、冷却至室温，得到黑色固体，用超纯水洗涤至中性，制得AFMFe₃O₄；

（2）吸附金属离子的氨基化介孔四氧化三铁（M²⁺-AFMFe₃O₄）的制备

分别量取80~100 mL、浓度为80~120 mg/L的Pb²⁺溶液和80~120 mg/L的Cd²⁺溶液置于锥形瓶中，分别加入 8~10 mg的氨基化介孔四氧化三铁，振荡1~3 h，使Pb²⁺ 和Cd²⁺被氨基化介孔四氧化三铁充分吸附，烘干，制得M²⁺-AFMFe₃O₄，即Pb²⁺-AFMFe₃O₄和Cd²⁺-AFMFe₃O₄，备用；

（3）Pb²⁺-AFMFe₃O₄和Cd²⁺-AFMFe₃O₄标记的抗体孵化物的制备

1）将0.5 mL、 2~5mg/L的Pb²⁺-AFMFe₃O₄和0.5 mL、2.5%的戊二醛混合，振荡1h，离心，倾倒上层溶液，加入0.4~0.6 mL 、pH 7.0~7.8的PBS溶液，超声使其分散均匀；加入3~5 μL一种环境雌激素抗体（Ab₁），振荡10~12 h后离心，用pH 7.0~7.8的PBS溶液定容至1mL，制得Pb²⁺金属离子标记的抗体孵化物（Pb²⁺-AFMFe₃O₄/Ab₁），置于4℃冰箱中备用；

2）将0.5 mL、2~5 mg/L的Cd²⁺-AFMFe₃O₄和0.5 mL、2.5%的戊二醛混合，振荡1h，离心，倾倒上层溶液，加入0.4~0.6 mL 、pH7.0~7.8的PBS溶液，超声使其分散均匀；加入3~5μL另一种环境雌激素抗体（Ab₂），振荡10~12 h后离心，用pH 7.0~7.8的PBS溶液定容至1mL，制得另一种金属离子标记的抗体孵化物（Cd²⁺-AFMFe₃O₄/Ab₂），置于4℃冰箱中备用；

（4）一种双通道环境雌激素免疫传感器的制备方法

1）将3~5μL、2 mg/mL超声处理分散均匀的石墨烯，滴涂在玻碳工作电极表面，自然晾干；

2）分别将3~5 μL的两种环境雌激素标准溶液滴涂在1）中得到的工作电极表面， 4℃冰箱中干燥；

3）滴涂5~7μL、100μg·mL^-1 的牛血清白蛋白于2）中得到的工作电极表面，置于4℃冰箱中直至干燥，超纯水清洗后，置于4 ℃冰箱中晾干；

4）分别取3~5 μL 1中（3）所制备的两种金属离子标记的抗体孵化物Pb²⁺-AFMFe₃O₄/Ab₁ 和Cd²⁺-AFMFe₃O₄/Ab₂滴涂于电极表面上，置于4 ℃冰箱中晾干，制得一种双通道环境雌激素免疫传感器。