[发明专利]一种连翘花中单体化合物的分离纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及从连翘花中分离纯化单体化合物连翘酯苷I和连翘酯苷A的方法。

背景技术

连翘[(Forsythia suspensa(Thunb.)Vahl)]，别名连壳、黄花条、黄链条花，是木犀科连翘属植物，秋季果实初熟尚带绿色时采收，除去杂质，蒸熟，晒干，习称“青翘”，果实熟透时采收，晒干，除去杂质，习称“老翘”。具有清热解毒、消肿散结、疏散风热之功效（中国药典.一部.2010）。连翘的主要化学成分以连翘酯苷为代表的苯乙醇苷类物质和以连翘苷为代表的木脂素类物质（王曙宾，等.中草药，2011，41（6）：909；李卫建，等.中草药.2006，37（6）：921；夏伯侯，等.中国中药杂志.2010，35（16）：2110）。连翘为落叶灌木，在我国分布很广，是我国典型的药用和绿化树种之一。连翘是初春最抢眼的植物，每年三月份开花，满枝金黄，艳丽可爱。连翘花颜色鲜黄、花期较长、花量大，市场上常做为花茶饮用，气味清新优雅，用于风热感冒所引发的咽喉肿痛等症（娄玉霞，等.中国卫生检验杂志.2008，18（9）：1765）。目前对连翘不同部位的研究主要集中在叶子与果实上，而对连翘花的研究较少。

目前国内外多采用柱层析法等传统方法分离纯化连翘中的连翘酯苷I和连翘酯苷A等单体化合物（Wang,等.Molecules.2009，14（3）：1324；邹琼宇，等.中国中药杂志.2012，37（1）：57），这类方法多使用大量的氯仿、甲醇等有毒的有机溶剂，而且柱层析法的不足之处是分离周期长，回收率低，分离效果不理想。另外，由于连翘花中各主要成分极性极为相近，通常无法在较短时间内使目标化合物得到有效的分离，需借助多次重复分离而造成目标化合物损失较多。

20世纪80年代，美国国立卫生院Yiochiro Ito博士发明了不同于传统的液相色谱法的新型液－液色谱分离方法—高速逆流色谱法(high speed counter-current chromatography,HSCCC)，简称逆流色谱法（Ito Y.Journal of Chromatography A，1981，214（1）：122）。逆流色谱是一种基于样品在两个互不混溶的溶剂之间分配作用的分离技术，是分离科学技术的一个新分支。逆流色谱可以在短时间内对目标化合物实现高效分离，可以避免分离样品与固体载体表面产生化学反应而变性和可逆吸附等缺点，而且对样品的预处理要求较低，适用于粗提取物的分离（Ito Y.Journal of Chromatography A，1991，538（1）：3）。近十年来，HSCCC在植物天然活性成分的分离纯化中的得到了广泛的运用，无论是一次制备的量，还是分离纯度均得到较大幅度的提高（Sutherland IA.Journal of Chromatography A，2007，1151（1-2）：6）。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了连翘花中单体化合物的分离纯化方法，目的在于提供一种快速、高效分离连翘花中单体化合物连翘酯苷I和连翘酯苷A的新方法，即使用高速逆流色谱法从连翘花中分离制备单体化合物的方法。成品中采用高效液相色谱法测定连翘酯苷I和连翘酯苷A的纯度均达到94％以上。该方法分离条件温和，分离效率高，且分离时间短，能得到高纯度的连翘酯苷I和连翘酯苷A。

本发明提供一种从连翘花中分离纯化单体化合物连翘酯苷I和连翘酯苷A的方法，包括如下步骤：

（1）制备连翘花提取物：

取连翘花药材，样品经粉碎机粉碎,过40目筛，得干燥的连翘花粉末；以连翘花粉末与乙醇质量比1:10的比例加入体积分数为95%的乙醇溶液中，回流提取2.0-3.0h，过滤；将滤渣重复上述提取步骤，再提取2次，合并滤液，减压浓缩至浸膏状，得连翘花提取物。

（2）提取物的进一步纯化：

将上述步骤制得的连翘花提取物加适量水混悬后，过聚酰胺树脂柱，使聚酰胺对提取液中的物质充分吸附：先用水溶液进行充分洗脱除去水溶性杂质，再用体积分数为30％的乙醇溶液洗脱，收集30％乙醇的洗脱液，减压浓缩干燥，即得聚酰胺粗分离物。

（3）高速逆流色谱分离连翘酯苷I和连翘酯苷A：

a.溶剂系统和样品溶液的配制