[发明专利]筛选与固定高效石油烃降解菌群的方法

权利要求书

1.筛选与固定高效石油烃降解菌群的方法，其特征在于：其步骤如下：

第一步：选取石油污染海区采集沉积物样品5g；

第二步：将样品加入含有1%柴油的液体无机盐培养基中；无机盐培养基成分为NaCl：22.0g，MgSO₄·7H₂O：2.0g，NH₄NO₃：1.0g，KCl：0.5g，KH₂PO₄：1.0g，Na₂HP0₄：3.0g，CaCl₂：0.1g，FeCl₃：0.005g，MnSO₄：0.002g，ZnCl₂:0.002g，蒸馏水1000mL；

第三步：采用含有1%柴油的固体无机盐培养基对第二步的石油烃降解菌进行涂布分离、纯化，并在4℃保种；所述固体无机盐培养为第二步中的液体无机盐培养基加入琼脂15g；

第四步：从第三步保种的石油烃降解菌中选取n株菌落形态和细胞形态各异的菌，测定单菌株的石油烃降解率，采用PCR方法扩增16S rDNA进行分子鉴定；

第五步：将n株菌混合培养，同时从n株菌中随机选出（n-1）株组合成                                               组组合不同的搭配混合培养，检测n组组合的石油烃降解率，确定石油烃降解菌群组合方案；

第六步：将第五步选定的石油烃降解菌群组合固定化，所述固定化选用海藻酸钠为固定化载体；石油烃降解菌群培养液与固定化载体的比例为1:2混合，用无菌注射器抽取含有石油烃降解菌群和海藻酸钠的混合液滴落至CaCl₂溶液中，静置30min，制成直径1~2 cm可沉降的固定化菌球，并4℃保存在无菌海水中。

2.根据权利要求1所述的筛选与固定高效石油烃降解菌群的方法，其特征在于：所述n大于等于3。

3.根据权利要求1所述的筛选与固定高效石油烃降解菌群的方法，其特征在于：所述PCR引物为27F（5-AgAgTTTgATCCTggCTCAg-3′）与1492R(5-TACggTTACCTTgTTACgATCC-3′)。

4.权利要求1所制得的高效石油烃降解菌群固定化菌球，其特征在于：其应用于海水和海洋沉积物的石油污染生物修复。