[发明专利]检测黄热病毒的侧向流免疫层析测定产品及其制备方法

权利要求书

1.检测黄热病毒的侧向流免疫层析测定产品，包括相互连接的样品垫、吸水垫和具有相互分离的检测线和质控线的包被膜，所述包被膜位于所述样品垫和所述吸水垫之间，其特征在于：所述样品垫上负载有磁性纳米粒子标记黄热病毒抗体，所述检测线包被有黄热病毒包被抗体，所述质控线包被有与所述磁性纳米粒子标记黄热病毒抗体特异结合的第二抗体；

所述磁性纳米粒子标记黄热病毒抗体为将待标记黄热病毒抗体和羧基修饰的磁性纳米粒子以肽键共价结合形成的聚合体。

2.根据权利要求1所述的侧向流免疫层析测定产品，其特征在于：所述待标记黄热病毒抗体的亲和常数为10⁸M^-1、10⁶～10⁸M^-1或10⁷～10⁸M^-1；所述黄热病毒包被抗体的亲和常数为10⁸M^-1、10⁶～10⁸M^-1或10⁷～10⁸M^-1；所述羧基修饰的磁性纳米粒子的平均直径为100nm、80-200nm或60-300nm；所述羧基修饰的磁性纳米粒子的直径变异系数为15%、10%-20%或10%-30%；所述羧基修饰的磁性纳米粒子的饱和磁化强度为40emu/g。

3.根据权利要求1或2所述的侧向流免疫层析测定产品，其特征在于：所述磁性纳米粒子标记黄热病毒抗体按照包括如下步骤的方法制备：将所述羧基修饰的磁性纳米粒子活化后与所述待标记黄热病毒抗体以50：3的质量比进行反应得到以肽键共价结合形成的磁性纳米粒子与黄热病毒抗体的偶联物。

4.根据权利要求3所述的侧向流免疫层析测定产品，其特征在于：所述磁性纳米粒子标记黄热病毒抗体的制备方法中，所述羧基修饰的磁性纳米粒子用1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺和N-羟基丁二酰亚胺进行活化；所述活化中，所述羧基修饰的磁性纳米粒子活化所用1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺和N-羟基丁二酰亚胺的浓度分别为5mM和10mM；所述活化的温度为37℃，时间为0.5h。

5.根据权利要求3或4所述的侧向流免疫层析测定产品，其特征在于：所述磁性纳米粒子标记黄热病毒抗体的制备方法中，所述将羧基修饰的磁性纳米粒子活化后与所述待标记黄热病毒抗体以50：3的质量比进行反应是在37℃在浓度为50mM pH为8.5的硼砂缓冲液中反应3.5小时。

6.根据权利要求3、4或5所述的侧向流免疫层析测定产品，其特征在于：所述磁性纳米粒子标记黄热病毒抗体的制备方法中还包括将所述磁性纳米粒子与黄热病毒抗体的偶联物用BSA溶液封闭后得到所述磁性纳米粒子标记黄热病毒抗体的步骤，所述BSA溶液的浓度为5%（质量百分浓度），所述封闭的温度为37℃，时间为0.5h。

7.根据权利要求1-6中任一所述的侧向流免疫层析测定产品，其特征在于：所述侧向流免疫层析测定产品按照权利要求8-10中任一所述的方法制备。

8.制备权利要求1-6中任一所述的检测黄热病毒的侧向流免疫层析测定产品的方法，包括：

Ⅰ、分别制备权利要求1-6中任一所述的检测黄热病毒的侧向流免疫层析测定产品中所述样品垫和所述包被膜；

Ⅱ、将步骤Ⅰ得到的所述样品垫、所述包被膜和吸水垫相互连接，得到所述包被膜位于所述样品垫和所述吸水垫之间的检测黄热病毒的侧向流免疫层析测定试纸。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述包被膜的制作方法包括：将所述黄热病毒包被抗体以为2mg/ml的浓度包被于硝酸纤维素膜得到所述检测线，将权利要求1-6中任一所述的检测黄热病毒的侧向流免疫层析测定产品中所述第二抗体以1mg/ml的浓度包被于所述硝酸纤维素膜上与所述检测线相互分离的区域，得到所述质控线，具有所述检测线和所述质控线的所述硝酸纤维素膜即为所述包被膜。

10.根据权利要求8或9所述的方法，其特征在于：所述样品垫的制作方法包括：将权利要求1-6中任一所述的磁性纳米粒子标记黄热病毒抗体以0.5mg/ml的浓度包被于玻璃纤维素膜得到所述样品垫。