[发明专利]检测黄热病毒的侧向流免疫层析测定产品及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及检测黄热病毒的侧向流免疫层析测定产品及其制备方法。

背景技术

侧向流免疫层析测定(LFIA,Lateralflow immunoassay)是20世纪末期出现的新型免疫检测方法，具有简便快速的特点，在多种病毒检测如HIV、乙肝病毒以及激素检测方面有广泛应用。其通过结合免疫标记技术和膜层析技术，在极短时间内，无需特殊条件，即可做出结果判断，已经成为一种重要的便捷免疫检测方法。黄热病（Yellow fever，YF）是黄热病毒（Yellow fever virus，YFV）引起的急性虫媒传染病，主要流行于非洲和南美洲，是旧版国际卫生条例规定监控的三种检疫传染病之一，新版国际卫生条例即《IHR（2005）》则将其纳入构成国际关注的突发公共卫生事件的疾病清单。该病经蚊媒传播，人类对黄热病毒普遍敏感，且不分年龄、性别和种族。该病一般为散发，但如果媒介蚊虫大量繁殖，可在人群中引起爆发流行，危害极大。其临床表现轻重不一，主要包括发热、剧烈头痛、黄疸、出血及蛋白尿等，重症患者病死率高达50％以上。

尽管目前我国尚无黄热病流行及病例报告，但必须认识到伴随着全球经济一体化进程加快和我国对外交流日益频繁，切不能忽视黄热病毒及其传播媒介传入国内的危险性。我国南方地区如福建、广东、广西、海南广泛存在可传播黄热病毒的埃及伊蚊，且黄热病常与登革热和疟疾等蚊媒病共存，临床上有时难以区别，因此必须加强疾病监测。早期快速准确检测黄热病毒不仅对于及时控制患者病情提高治愈率有关键作用，同时对于口岸卫生检疫机构及时甄别和隔离病人、严防疫情传入国内至关重要。

目前国内外黄热病检测方法种类繁多。按检测靶标来主要可分为：核酸分子检测、病毒分离鉴定、抗体检测以及抗原检测等四大类。但大部分由于需要较高的技术和条件以及检测速度相对较慢，限制了在口岸检疫中的现场使用。为满足口岸卫生检疫需要，研制灵敏可靠、结果便于保存及量化分析、操作简便快速的检测产品对于疫情监控和防范具有重要意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供检测黄热病毒的侧向流免疫层析测定产品及其制备方法。

本发明所提供的检测黄热病毒的侧向流免疫层析测定产品，包括相互连接的样品垫、吸水垫和具有相互分离的检测线和质控线的包被膜，所述包被膜位于所述样品垫和所述吸水垫之间，其特征在于：所述样品垫上负载有磁性纳米粒子标记黄热病毒抗体，所述检测线包被有黄热病毒包被抗体，所述质控线包被有与所述磁性纳米粒子标记黄热病毒抗体特异结合的第二抗体；

所述磁性纳米粒子标记黄热病毒抗体为将待标记黄热病毒抗体和羧基修饰的磁性纳米粒子以肽键共价结合形成的聚合体。

上述侧向流免疫层析测定产品中，所述检测线与所述样品垫的距离大于所述质控线与所述样品垫的距离。所述黄热病毒包被抗体可为黄热病毒单克隆抗体或黄热病毒多克隆抗体；所述待标记黄热病毒抗体可为黄热病毒单克隆抗体或黄热病毒多克隆抗体。

上述侧向流免疫层析测定产品中，所述待标记黄热病毒抗体的亲和常数为10⁸M^-1、10⁶～10⁸M^-1或10⁷～10⁸M^-1；所述黄热病毒包被抗体的亲和常数为10⁸M^-1、10⁶～10⁸M^-1或10⁷～10⁸M^-1；所述羧基修饰的磁性纳米粒子的平均直径为100nm、80-200nm或60-300nm；所述羧基修饰的磁性纳米粒子的直径变异系数（CV）可为15%、10%-20%或10%-30%；所述羧基修饰的磁性纳米粒子的饱和磁化强度可为40emu/g。

其中，所述待标记黄热病毒抗体的亲和常数具体可为10⁸M^-1，所述黄热病毒包被抗体的亲和常数具体可为10⁶～10⁸M^-1，所述羧基修饰的磁性纳米粒子的平均直径可为100nm，所述羧基修饰的磁性纳米粒子的直径变异系数（CV）可为15%，所述羧基修饰的磁性纳米粒子的饱和磁化强度可为40emu/g。

所述羧基修饰的磁性纳米粒子具体可为羧基修饰的磁性Fe₃O₄纳米粒子。