[发明专利]一种液相色谱外标法测定1,3-二羟基丙酮含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种液相色谱外标法测定1,3-二羟基丙酮（DHA）含量的方法。具体涉及一种使用液相色谱外标法测定以甲醛为原料在离子液为催化剂、有机碱为助催化剂、在140℃，均相反应30分钟的条件下制备1,3-二羟基丙酮，并测定合成混合液中1,3-二羟基丙酮含量的方法。

背景技术

1,3-二羟基丙酮(1,3-Dihydroxyacetone)简称DHA，是多羟基酮糖，是最简单的酮糖，外观是带有甜味的白色粉末状结晶，易溶于水、乙醇、乙醚和丙酮等有机溶剂，熔点为75-80℃，水溶性>250g/L(20℃)，在pH为6.0时稳定。

1,3-二羟基丙酮是一种重要的化工原料、医药中间体和功能添加剂。其用途主要是一种天然存在具有生物可降解性的酮糖,可食用且对人体和环境无毒害；是一种具有多功能的添加剂,可用于化妆品、医药和食品行业等。同时其能广泛参与诸如聚合、缩合等反应,是一种重要的医药、农药合成中间体。

目前，1,3-二羟基丙酮生产方法主要有化学合成法和微生物发酵法。

北京旭阳化工技术研究院有限公司独立研发了由甲醛为原料在离子液为催化剂、有机碱为助催化剂、在140℃，均相反应30分钟的条件下制备1,3-二羟基丙酮，它是一种绿色环保新型的合成工艺路线。

甲醛、离子液、有机碱的摩尔比=30:1:0.02。

在以甲醛为原料，离子液为催化剂、有机碱为助催化剂制备1,3-二羟基丙酮研发与生产过程中，反应液中1,3-二羟基丙酮的准确快速定量分析非常重要，这关系到甲醛转化率的高低和离子液催化剂选择性的确定。但是目前还没有普遍认可的较为准确快速的分析方法，严重制约了1,3-二羟基丙酮合成工艺的优化。

DHA主要分析方法比较

DHA的分析方法主要有薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法等方法。

薄层色谱分析法所用试剂昂贵且准确定量困难。

张智宏、孙小娟在《二羟基丙酮的气相色谱分析》（《分析测试学报》,1999,18(3)56-63）中采取气相色谱来定量测定DHA。

但由于DHA的挥发性不高,需要先将其衍生化为易挥发且稳定性较高的衍生物才可间接测定DHA含量，但此方法预处理复杂,且衍生化过程中水分的影响较大,需要加入大量的衍生化试剂。

中国药科大学生命科学与技术学院陈菁、陈建华等在中国生化药物杂志（Chinese Journal of Biochemical Pharmaceutics2007年第28卷第3期）提出建立二羟基丙酮(DHA)发酵过程中产物和残余甘油底物的高效液相色谱检测方法。方法流动相为乙腈-水(90:10),色谱柱为Lichrospher5-NH₂(4.6mm*250mm),用紫外检测器在271nm处检测DHA,用示差折光检测器检测甘油。

江南大学饶志明、徐美娟中国生物工程杂志（China Biotechnology，2008,28(1):61-64）建立了测定1,3-二羟基丙酮(DHA)的高效液相色谱(HPLC)方法。以Allt ima C18(250*4.6mm)为分离柱,5%甲醇水溶液(0.05%H₃PO₄调PH至3.0)，流速为1ml/min,用紫外检测器在200nm处检测DHA。

但是上述两种HPLC分析方法一是测定以甘油为原料采用微生物发发酵液中DHA含量，正常情况下，发酵液显示弱酸性。

北京旭阳化工技术研究院有限公司独立研发以甲醛在离子液为催化剂制备1,3-二羟基丙酮合成工艺,反应液显示碱性（PH=9.5-11.0）。且色谱柱在高比例水为流动相长时间分析运行条件下，很容易造成柱固定相疏水坍塌，即DHA保留明显降低或完全不保留的现象(DHA的保留时间发生严重漂移)。

发明内容

本发明的发明人针对研发的独特合成工艺，经过潜心研究发现：采用合适的流动相乙腈-水(10∶90)水用氨水调节pH=10.5；DAD二极管阵列检测器，ZORBAX Extend-C18。能够准确、快捷、可靠地测定由甲醛在离子液为催化剂制备1,3-二羟基丙酮含量。由此完成了本发明。

本发明的目的为提供一种液相色谱外标法测定1,3-二羟基丙酮含量的方法，其特征在于，采用标准1,3-二羟基丙酮作为外标物，乙腈-水溶液为溶剂配制标准溶液，其中，在乙腈-水溶液中，乙腈与水的体积比为10:90，且水用氨水调节pH至10.5。

在本申请的一个优选实施方式中，所述方法包括如下步骤，该方法包括如下步骤：