[发明专利]灰杨组培体系的建立方法

权利要求书

1.灰杨组培体系的建立方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)选取健壮灰杨植株，将灰杨的叶片垂直于主脉剪伤，接种于包含或组成为MS+Kinetin0.08-0.12mg/L+NAA0.2-0.4mg/L+2，4-D0.4-0.6mg/L的培养基，暗室培养，每16-24天继代一次；

(2)取疏松、生长旺盛的愈伤组织，转入液体培养基，所述培养基为步骤(1)的培养基基础上加入25-35g/L的蔗糖，在20-30℃条件下避光振荡培养，转速为100-200r/min；继代培养前，将悬浮液用150-250目钢网过滤，除去大量损伤细胞的残存碎片，再转入新鲜培养基，继续悬浮培养，继代3～4从而建立体系；

(3)从继代培养的组培苗中选取健壮、生长整齐的组培苗，剪成1.5-2.5cm左右的茎尖茎段，植入生根培养基中，所述生根培养基为包含或组成为1/2MS+AgNO₃3-5mg/L+NAA0.04-0.06mg/L的培养基；

(4)选择生长旺盛、根系发达的健壮组培苗，将瓶口的包扎物逐渐打开，使组培苗逐步适应外界环境，由开小口到完全敞开约需6-10天，在开瓶口后加入少量的水，使用玻璃罩扣住在阳光下驯化6-8天后移栽到花盆，移栽前把附着于幼苗根部的培养基冲洗干净；任选地，在移栽到花盆之前使用一定浓度的多菌灵溶液泡洗；移栽到花盆后仍然用玻璃罩扣养，逐步揭开玻璃罩，直到苗木在花盆中发芽生长再移入大田；灰杨组培苗移栽时，幼苗期空气相对湿度控制在80％以上，温度为18～25℃，以及适宜的光照强度。

2.根据权利要求1所述的方法，所述的步骤(1)的培养基为MS+Kinetin0.1mg/L+NAA0.3mg/L+2，4-D0.5mg/L。

3.根据权利要求1所述的方法，所述的步骤(2)的培养基为1/2MS+AgNO₃4mg/L+NAA0.05mg/L。