[发明专利]基于DNA自组装的非酶SNP检测方法

权利要求书

1.基于DNA自组装的非酶检测SNP 的方法，包括如下步骤：

1）设计分离捕获探针CP、单链MP、探针AP1和AP2，其中：

CP和MP可分别和目标序列的5’端和3’端互补为双链，在形成的双链中，CP和MP之间存在单链缺刻，该单链缺刻左侧或右侧的核苷酸与目标序列的SNP位点互补；

CP的一个末端连接有分离标记；

自组装AP1的5’端和3’端可分别和AP2的3’端和5’端互补，自组装形成双链DNA，AP1和AP2的5’端和3’端中至少部分序列可与MP的一端互补为双链；

2）将CP、MP、核酸连接酶和样本加入反应液中，混匀，反应完全；

3）将反应液中生成的双链DNA解链为单链DNA；

4）将连接有分离标记的单链DNA分离，清洗去除其他游离DNA链；

5）将清洗后的带分离标记的单链DNA、AP1、AP2加入反应液，反应完全以形成自组装双链；

6）将连接有分离标记的DNA链分离，清洗去除其他游离DNA链；

7）通过检测清洗后的DNA链中双链DNA的量，确定SNP的量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：CP和MP的长度独立为15～30bp。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：AP1和和AP2的长度独立为20～50 bp。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：分离标记为亲合基团、固相载体。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：核酸连接酶选自 T4 DNA连接酶、E.coli DNA连接酶、Tsc DNA连接酶。

6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：将清洗后的DNA链与特异性嵌入双链DNA中的荧光染料反应，之后检测其荧光值确定双链DNA的量。

7.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：通过加热之后急冷将双链DNA解链为单链DNA。

8.实现权利要求1～7任意一项权利要求所述方法的检测试剂盒。