[发明专利]用于沙门氏菌实时定量PCR检测的特异性引物、探针及试剂盒

权利要求书

1.一种用于沙门氏菌实时定量PCR检测的特异性引物和探针，其特征在于：上游引物的序列如SEQ ID NO:1所示，下游引物的序列如SEQ ID NO:2所示，探针的序列如SEQ ID NO:3所示，探针的5’端有FAM荧光报告基团，3’端有BHQ荧光淬灭基团。

2.一种用于沙门氏菌实时定量PCR检测的试剂盒，其特征在于：含有如权利要求1所述的特异性引物和探针、PCR缓冲液、dNTPs、MgCl₂、Taq酶、阳性对照和阴性对照。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述阳性对照为沙门氏菌ATCC14028标准株。

4.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于：所述阴性对照为ddH₂O。

5.一种沙门氏菌的实时定量PCR检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）提取待测样品DNA；

（2）以待测样品DNA为模板，利用如权利要求1所述的特异性引物和荧光探针进行实时荧光PCR扩增；

（3）根据待检样品的Ct值，对照预先建立的沙门氏菌标准株的标准曲线，计算样品中沙门氏菌的浓度。

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述实时荧光PCR扩增的体系组成如下：

组分                 终浓度

PCR缓冲液            1×

dNTPs                 0.2mM 

MgCl₂                          4.0mM

Taq酶                 1U

特异性引物            0.3μM

TaqMan探针           0.2μM

溶剂为ddH₂O ，

实时荧光PCR条件为：95℃预变性5min，然后94℃ 15s、60℃ 45s、72℃ 10s共45个循环。