[发明专利]一种玉米抗病相关基因MR4及其在玉米抗病改良中的应用

权利要求书

1.一种玉米抗病基因MR4，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示。

2.一种由如权利要求1所述的玉米抗病基因MR4编码的蛋白质，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

3.一种如权利要求1所述的玉米抗病基因MR4的表达载体，通过下述方法构建：将通用双元载体pTF102的多克隆位点切除，再将其GUS基因上游的2×35S启动子换成玉米泛素基因启动子，获得遗传转化载体pTE102-M；将玉米抗病基因MR4用限制性内切酶BamHI和KpnI消化后回收包含MR4完整阅读框的DNA片段；将回收的DNA片段插入到遗传转化载体pTE102-M的限制性内切酶酶切位点。

4.一种如权利要求1所述玉米抗病基因MR4在玉米抗病改良中的应用。

5.一种通过超量表达如权利要求1所述玉米抗病基因MR4培育抗病玉米的方法，包括下述步骤：取常规种植玉米自交系，当其开花期处于雌穗抽丝前进行套袋隔离，并人工协助自交授粉；授粉后继续套袋隔离，从第一次授粉开始，分别在24小时和48小时再次授粉，取下整穗玉米放入75%酒精中消毒5min，无菌蒸馏水冲洗3遍后，无菌环境吹干，用无菌刀片剥离下完整幼胚，进一步用75%酒精和0.1%升汞消毒，无菌水洗净后吹干；用农杆菌介导的方法将玉米抗病基因MR4表达载体pTF102-MR导入吹干的幼胚；转化的未成熟胚在20-25℃黑暗共培养3天，所用培养基为MS培养基+AS（100umol/L)，再在新鲜的上述培养基中继续暗培养7天后，转到含1.5mg/L Bialaphos除草剂的MS固体培养基中28℃筛选培养，15-20天后用3.0mg/L的Bialaphos进行2次筛选，筛选出的幼胚长到三叶期时将苗移至大盆中，在培养室中炼苗3-5天后移入温室内，进行正常的管理，最后得到转基因玉米。