[发明专利]用于检测CLCN1基因突变的方法、试剂盒及特异性引物

权利要求书

1.一种非诊断目的检测CLCN1基因的编码区及内含子剪切位点突变的方法，其包括以下步骤：

（1）使用特异性扩增引物对通过PCR扩增待测样本的CLCN1基因，从而获得PCR扩增产物；

（2）采用所述特异性扩增引物对中的正向引物将步骤（1）中的扩增产物进行测序扩增，从而获得测序扩增产物；

（3）对步骤（2）中获得的测序扩增产物进行测序，并将测序峰图与数据库中的CLCN1基因参考序列进行对比，从而确定基因的突变位点。

2.权利要求1的方法，其中在步骤（1）和步骤（2）之间包括纯化PCR扩增产物的步骤，优选地，所述纯化方法为通过凝胶电泳和millipore纯化板进行纯化。

3.权利要求1的方法，其中在步骤（2）和步骤（3）之间还包括纯化所述测序扩增产物的步骤，优选地，所述纯化方法为通过EDTA和无水乙醇进行纯化。

4.权利要求1-3任一项的方法，其中在所述步骤（3）中测序方法为Sanger法或第二代测序法。

5.权利要求1-3任一项的方法，其中所述PCR扩增引物对的核苷酸序列是SEQ ID NO:1和16、SEQ ID NO:2和17、SEQ ID NO:3和18、SEQ ID NO:4和19、SEQ ID NO:5和20、SEQ ID NO:6和21、SEQ ID NO:7和22、SEQ ID NO:8和23、SEQ ID NO:9和24、SEQ ID NO:10和25、SEQ ID NO:11和26、SEQ ID NO:12和27、SEQ ID NO:13和28、SEQ ID NO:14和29、SEQ ID NO:15和30中的一对或多对，并且/或者所述测序扩增引物的核苷酸序列是SEQ ID NO:1-15中的一个或多个。

6.权利要求1-3任一项的方法，其中所述样品是血样，优选是分离自哺乳动物，特别是人的血样。

7.用于扩增CLCN1基因的特异性引物，其序列是SEQ ID NO:1-30中的任选一项。

8.权利要求7的特异性引物用于非诊断目的检测CLCN1基因突变位点的用途。

9.用于检测CLCN1基因突变位点的试剂盒，其包含用于扩增CLCN1基因的扩增引物，其核苷酸序列为SEQ ID NO:1和16、SEQ ID NO:2和17、SEQ ID NO:3和18、SEQ ID NO:4和19、SEQ ID NO:5和20、SEQ ID NO:6和21、SEQ ID NO:7和22、SEQ ID NO:8和23、SEQ ID NO:9和24、SEQ ID NO:10和25、SEQ ID NO:11和26、SEQ ID NO:12和27、SEQ ID NO:13和28、SEQ ID NO:14和29、SEQ ID NO:15和30中的一对或多对；和/或用于测序扩增的引物，其核苷酸序列为SEQ ID NO:1-15中的一个或多个，任选地，所述试剂盒还包括用于PCR扩增反应的酶和试剂，和/或用于测序扩增反应的酶和试剂，和/或用于提取血液DNA的试剂。

10.权利要求9的试剂盒用于非诊断目的检测CLCN1基因突变的用途。