[发明专利]用于检测CLCN1基因突变的方法、试剂盒及特异性引物

说明书

本发明是申请日为2011年05月19日、申请号为201110129334.5、发明名称为“用于检测CLCN1基因突变的方法、试剂盒及特异性引物”的专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及用于检测CLCN1基因突变的方法、试剂盒及特异性引物。具体而言，本发明涉及用于非诊断目的检测CLCN1基因的编码区及内含子剪切位点突变的方法、试剂盒及特异性引物。

背景技术

真核生物基因由编码蛋白质的外显子(exon)和不编码蛋白质的间插序列内含子（intron）组成。外显子是真核生物基因的一部分，它在剪接后仍会被保存下来，并可在蛋白质生物合成过程中被表达为蛋白质。外显子是最后出现在成熟RNA中的基因序列,又称表达序列，是既存在于最初的转录产物中，也存在于成熟的RNA分子中的核苷酸序列。

通过PCR方法对基因组DNA进行扩增，将得到的目的片段进行测序，并与正常序列进行对比，可以获得基因突变的信息。在分子生物学研究中，DNA的序列分析是进一步研究和改造目的基因的基础。Sanger于1977年建立了双脱氧核糖核酸链末端终止法测序。Sanger高通量测序可以半小时完成96个样本的测序，随着测序成本的降低，这种方法越来越适合做大规模检测，既省时又高效。

氯离子通道基因CLCN1（Chloride Channel1）的核苷酸序列是已知的（Genbank Accession No.NG_009815.1）。根据HGMD等数据库提供的信息，CLCN1的突变主要分布在外显子及剪切位点侧翼区，包括100余个点突变。详细目录见表1。

表1CLCN1突变位点

1097_1098delTG1183_1187del51278_1281delTTTG1437_1450del142264delC2329delG2518_2519delCT1259_1260insC2513_2514insCTCA599_600insG830_831insG898_899delinsTAIVS1+3A-TIVS13+1G-AIVS17+1G-TIVS18+5C-TIVS19+2T-AIVS22-1G-AIVS5+1G-AIVS5+2T-AIVS8+1G-AR338QR377XT398IA402VP408AQ412PF413CA415VI424MF428SQ445XS471FP480TP480HP480LC481XG482RM485VR496SG499RA531VT550MI556NV563IA566TP575ST631IQ658XA659VE67XR669CQ68XF708LE717XK752RQ74XQ807XG859DP883TR894XP932LR105CM128VS132CD136GY150CF161VV165GF167LE193KL198VG200RA218TG230EV236LC242XY261CT268MC271RG276DL283FV286AF288SS289NE291KV299LR300QW303RF306LF307ST310MA313TA313VR317XR317QR317LA320VV321LI329TA331TD644GD265L2655_2656insC