[发明专利]一种高效水解大豆异黄酮糖苷的β-葡萄糖苷酶基因与应用

权利要求书

1.一种β-葡萄糖苷酶DNA，其特征在于核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种新型β-葡萄糖苷酶，其特征在于氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

3.一种包含权利1所述的β-葡萄糖苷酶DNA的表达载体。

4.一种基因工程菌，其特征在于通过如权利要求3所述的表达载体转化寄主细胞而得。

5.一种重组β-葡萄糖苷酶的制备方法，其特征是：用权利要求3所述的表达载体转化寄主细胞，培养转化体，从培养物中获得重组β-葡萄糖苷酶。

6.根据权利要求5所述的重组β-葡萄糖苷酶的制备方法，其特征在于：将如权利要求3所述的表达载体的目的片段经Bam HI、Hind III双酶切，与pET-28a (+)载体连接，转化至大肠杆菌BL21，经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导，得到高效可溶性表达。

7.根据权利要求6所述的重组β-葡萄糖苷酶的制备方法，其特征是IPTG终浓度为0.1-1.3 mM，诱导温度为18-37℃。

8.如权利要求1所述的新型β-葡萄糖苷酶的宏基因组学克隆方法，其特征是：提取环境中的总DNA并纯化，将纯化后的总DNA经Hind Ⅲ酶切，连接pUC118载体，电击转化大肠杆菌DH5α高效感受态建立宏基因组文库，通过涂布含七叶苷和柠檬酸铁铵的LB平板显色法得到阳性克隆子，经测序和BLAST比较并设计引物，从而克隆到目的片段。

9.权利要求2所述的重组β-葡萄糖苷酶在水解大豆异黄酮糖苷中的应用。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于所述的应用条件为pH 5.5-8.5。