[发明专利]一种以黑豆为原料制备高活性纳豆激酶的方法

权利要求书

1.一种以黑豆为原料制备高活性纳豆激酶的方法，其特征在于包括如下步骤：用特制营养液浸泡黑豆，将浸泡后的黑豆进行蒸煮，再接种纳豆菌进行发酵；

所述的特制营养液包括如下浓度成分：乳糖5-15g/L、胰蛋白胨10-30g/L、Na₂HPO₄·12H₂O 1-10g/L、NaH₂PO₄·2H₂O 0.5-1.5g/L、MgSO₄·7H₂O 0.1-1g/L、CaCl₂ 0.1-0.5g/L，pH 7.0-7.5。

2.根据权利要求1所述的以黑豆为原料制备高活性纳豆激酶的方法，其特征在于所述的特制营养液包括如下浓度成分：乳糖10g/L、胰蛋白胨20g/L、Na₂HPO₄·12H₂O 5g/L、NaH₂PO₄·2H₂O 1g/L、MgSO₄·7H₂O 0.5g/L、CaCl₂ 0.2g/L，pH 7.2。

3.根据权利要求1所述的以黑豆为原料制备高活性纳豆激酶的方法，其特征在于：所述的黑豆与特制营养液的质量体积比为1 : 3；所述的浸泡为15-25℃浸泡16-20h。

4.根据权利要求1所述的以黑豆为原料制备高活性纳豆激酶的方法，其特征在于：所述的蒸煮为0.1MPa 、121℃蒸煮30-40min。

5.根据权利要求1所述的以黑豆为原料制备高活性纳豆激酶的方法，其特征在于：所述的接种为将蒸煮后的黑豆自然冷却至40-50℃后于无菌条件下按黑豆重量的10%接种纳豆菌种子液。

6.根据权利要求1所述的以黑豆为原料制备高活性纳豆激酶的方法，其特征在于：所述的纳豆菌为Bacillus subtilis QK02，由中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC NO: M 203078。

7.根据权利要求1所述的以黑豆为原料制备高活性纳豆激酶的方法，其特征在于：所述的发酵的条件为温度37-42℃，湿度75%-85%，物料厚度2-3cm，发酵时间为24h。

8.根据权利要求1-7任一项所述的以黑豆为原料制备高活性纳豆激酶的方法，其特征在于还包括提取分离和冷冻干燥步骤。

9.根据权利要求8所述的以黑豆为原料制备高活性纳豆激酶的方法，其特征在于：所述的提取分离包括浸提、沉淀、柱层析步骤；其中，浸提为用生理盐水于4℃浸提12-24h；沉淀为用饱和度为25%和65%的硫酸铵进行分级沉淀；柱层析填料用CM-Sepharose Fast Flow。

10.根据权利要求8所述的以黑豆为原料制备高活性纳豆激酶的方法，其特征在于：所述的冷冻干燥的条件为真空度10 Pa、冷阱温度-50℃、干燥时间24h。