[发明专利]一种碱性果胶酶PelN及其编码基因与应用

权利要求书

1.一种蛋白质，是如下（a）或（b）的蛋白质：

（a）由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

（b）将序列表中序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有碱性果胶酶功能的由序列表序列1衍生的蛋白质。

2.权利要求1所述蛋白质的编码基因；

所述基因可为如下1）或2）或3）的DNA分子：

1）序列表中序列2的第7位至第1434位所示的DNA分子；

2）在严格条件下与1）限定的DNA序列杂交且编码具有碱性果胶酶活性蛋白的DNA分子；

3）与1）或2）限定的DNA序列具有90%以上同源性且编码具有碱性果胶酶活性蛋白的DNA分子。

3.含有权利要求2所述基因的重组表达载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。

4.根据权利要求3所述的重组表达载体或重组菌，其特征在于：

所述重组表达载体是将所述基因插入载体pET22b的NcoI和XhoI位点间得到的；

所述重组菌是将所述重组表达载体导入大肠埃希氏菌(Escherichia coli)得到的；具体可为大肠埃希氏菌(Escherichia coli)BL21（DE3）PelN，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC No.7166。

5.权利要求1所述蛋白质在降解果胶或制备具碱性果胶酶活性的产品中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述果胶为多聚半乳糖醛酸。

7.根据权利要求5或6所述的应用，其特征在于：所述降解的pH值为7.1—11.0，或7.6—10.4，或8.1—10.4，或8.6—10.4，或9.0—10.4，或9.4—10.4；具体可为7.6、8.1、8.6、9.0、9.4、9.8或10.4；

所述降解的温度为35℃—75℃，或40℃—70℃，或50℃—70℃，或55℃—70℃，或60℃—70℃；具体可为35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃、70℃或75℃。

8.一种生产碱性果胶酶的方法，包括如下步骤：将权利要求4所述大肠埃希氏菌BL21(DE3)PelN接种至发酵培养基，35-37℃振荡培养至OD_600nm=0.4-0.6，然后加入IPTG至终浓度为100-200μM，28-32℃继续振荡培养40-45小时，得到碱性果胶酶。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述发酵培养基的溶剂为水，溶质及其在所述发酵培养基中的终浓度分别为：胰蛋白胨10-15g/L，酵母提取物15-24g/L，甘油8-12g/L，磷酸二氢钾10-17mmol/L，磷酸氢二钾65-75mmol/L。

10.根据权利要求8或9所述的方法，其特征在于：所述大肠埃希氏菌BL21(DE3)PelN以种子液的方式接种至所述发酵培养基；接种量为1%-5%；

所述种子液的制备方法如下：将所述大肠埃希氏菌BL21(DE3)PelN接种至种子培养基，35-37℃振荡培养至OD_600nm=6.0-8.0，即为所述种子液；

所述种子培养基的溶剂为水，溶质及其在所述种子培养基中的终浓度分别为：胰蛋白胨10-15g/L，酵母提取物5-8g/L，氯化钠4-6g/L；所述种子培养基的pH值为7.0-7.2。