[发明专利]一种唾液链球菌尿素酶抗体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种唾液链球菌尿素酶抗体，其特征在于，所述的抗体为抗UreC目的蛋白的抗体，所述的UreC目的蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。

2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述的抗体为多克隆抗体，由以下方法制备：以UreC目的蛋白作为抗原，免疫动物，取血，收集抗血清并纯化分离得到。

3.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述的抗体的制备方法包括：

a) PCR反应合成ureC的基因片段，上游引物和下游引物序列分别为SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示；

b) 构建含有ureC基因片段的重组质粒pET32M-ureC；

c) 将重组正确的质粒pET32M-ureC转化大肠杆菌E.coli BL21，诱导目的蛋白表达；

d) 聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定UreC目的蛋白； 

e) 采用镍离子亲和层析的方法对UreC目的蛋白进行纯化；

f) 使用纯化的UreC目的蛋白和免疫佐剂混合，免疫大兔，初次免疫在背部皮下多点免疫；每隔2周免疫一次，免疫5次；5周后收集抗血清，采用Protein G亲和纯化方法从所述抗血清中获得所述的抗体。

4.根据权利要求1-3任一所述的抗体在制备唾液链球菌尿素酶检测试剂或检测试剂盒中的应用。

5.一种抗血清，其特征在于，所述的抗血清包含权利要求1-3任一所述的抗体。

6.根据权利要求5所述的抗血清在制备唾液链球菌尿素酶检测试剂或检测试剂盒中的应用。

7.一种检测唾液链球菌尿素酶的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包含权利要求1-3任一所述的抗体。

8.一种唾液链球菌尿素酶抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：以UreC目的蛋白作为抗原，免疫动物，取血，收集抗血清并纯化分离得到，所述的抗体与UreC目的蛋白特异性结合，所述的UreC目的蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

a) PCR反应合成ureC的基因片段，上游引物和下游引物序列分别为SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示；

b) 构建含有ureC基因片段的重组质粒pET32M-ureC；

c) 将重组正确的质粒pET32M-ureC转化大肠杆菌E.coli BL21，诱导目的蛋白表达；

d) 聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定UreC目的蛋白； 

e) 采用镍离子亲和层析的方法对UreC目的蛋白进行纯化；

f) 使用纯化的UreC目的蛋白和免疫佐剂混合，免疫大兔，初次免疫在背部皮下多点免疫；每隔2周免疫一次，免疫5次；5周后收集抗血清，采用Protein G亲和纯化方法从所述抗血清中获得所述的抗体。

10.一种检测唾液链球菌尿素酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：将样品与权利要求1-3任一所述的抗体接触，检测是否形成抗原-抗体复合物，其中形成复合物就表示样品中存在唾液链球菌尿素酶。