[发明专利]一种唾液链球菌尿素酶抗体及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地说，是一种唾液链球菌尿素酶抗体及其制备方法和应用。

背景技术

唾液链球菌（Streptococcus salivarius）是口腔正常菌群之一，能产生较高水平的尿素酶，其分解唾液和龈沟液中的尿素产生的氨能够升高菌斑的pH值，减少龋齿的发生。唾液链球菌尿素酶是一种利用镍离子的多亚基酶，完整的基因序列包括11个片段，即：ureIABCEFGDMQO，其中ureA, ureB, ureC分别编码结构亚基β、γ、α，三者组成核心功能片段，并在尿素酶的免疫保护性和尿素分解过程中发挥极为重要的作用，但国内外未见该酶核心功能片段克隆表达的报道。

中国专利文献CN100535119C公开了一种制备唾液链球菌尿素酶基因的方法，包括对所述的唾液链球菌57. I尿素酶基因的分段克隆和将分段克隆的产物逐步连接为完整的尿素酶基因。但是关于一种唾液链球菌尿素酶抗体及其制备方法和应用目前还未见报道。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种唾液链球菌尿素酶抗体。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：一种唾液链球菌尿素酶抗体，所述的抗体为抗UreC目的蛋白的抗体，所述的UreC目的蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。

所述的抗体为多克隆抗体，由以下方法制备：以UreC目的蛋白作为抗原，免疫动物，取血，收集抗血清并纯化分离得到。

所述的抗体的制备方法包括：

a) PCR反应合成ureC的基因片段，上游引物和下游引物序列分别为SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示；

b) 构建含有ureC基因片段的重组质粒pET32M-ureC；

c) 将重组正确的质粒pET32M-ureC转化大肠杆菌E.coliBL21，诱导目的蛋白表达；

d) 聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定UreC目的蛋白； 

e) 采用镍离子亲和层析的方法对UreC目的蛋白进行纯化；

f) 使用纯化的UreC目的蛋白和免疫佐剂混合，免疫大兔，初次免疫在背部皮下多点免疫；每隔2周免疫一次，免疫5次；5周后收集抗血清，采用Protein G亲和纯化方法从所述抗血清中获得所述的抗体。

本发明的第二个目的是，提供一种唾液链球菌尿素酶抗体的应用。

为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：所述的抗体在制备唾液链球菌尿素酶检测试剂或检测试剂盒中的应用。

本发明的第三个目的是，提供一种抗血清。

为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是：一种抗血清，所述的抗血清包含所述的唾液链球菌尿素酶抗体。

本发明的第四个目的是，提供一种抗血清的应用。

为实现上述第四个目的，本发明采取的技术方案是：所述的抗血清在制备唾液链球菌尿素酶检测试剂或检测试剂盒中的应用。

本发明的第五个目的是，提供一种检测唾液链球菌尿素酶的试剂盒。

为实现上述第五个目的，本发明采取的技术方案是：一种检测唾液链球菌尿素酶的试剂盒，所述的试剂盒包含所述的唾液链球菌尿素酶抗体。

本发明的第六个目的是，提供一种唾液链球菌尿素酶抗体的制备方法。

为实现上述第六个目的，本发明采取的技术方案是：一种唾液链球菌尿素酶抗体的制备方法，包括以下步骤：以UreC目的蛋白作为抗原，免疫动物，取血，收集抗血清并纯化分离得到，所述的抗体与UreC目的蛋白特异性结合，所述的UreC目的蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。

包括以下步骤：

a) PCR反应合成ureC的基因片段，上游引物和下游引物序列分别为SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示；

b) 构建含有ureC基因片段的重组质粒pET32M-ureC；

c) 将重组正确的质粒pET32M-ureC转化大肠杆菌E.coliBL21，诱导目的蛋白表达；

d) 聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定UreC目的蛋白； 

e) 采用镍离子亲和层析的方法对UreC目的蛋白进行纯化；