[发明专利]林可霉素、克林霉素和大观霉素的残留分析方法

说明书

技术领域

本发明属于兽药残留分析技术领域，本发明具体涉及一种林可胺类和大观霉素药物的残留分析方法，本发明与分析化学领域相关。

背景技术

林可霉素(lincomycin)和克林霉素(clindamycin)属于林可胺类抗生素。克林霉素是林可霉素的衍生物，其抗菌作用、应用与林可霉素相同，但抗菌效力比林可霉素强4-8倍。林可胺类抗生素对革兰氏阳性菌(葡萄球菌、溶血性链球菌和肺炎球菌等)有较强抗菌作用，对支原体也有抑制作用，但对革兰氏阴性菌如(粪链球菌、某些梭状芽胞杆菌、奴卡菌、酵母菌等)无效。大观霉素(spectinomycin)属于氨基糖苷类抗生素，对革兰氏阴性菌(如布鲁氏菌、克雷伯菌属、变形杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌等)有较强作用，对革兰氏阳性菌(链球菌、葡萄球菌等)作用较弱，对支原体亦有一定作用。大观霉素、林可霉素两者联合使用具协同作用，常用于防治猪腹泻、猪的支原体肺炎和败血支原体引起的鸡慢性呼吸道病等，是兽医上常用的复方制剂。

林可霉素和克林霉素对敏感人群副作用较强：可引起消化道反应，如恶心、呕吐等；还可导致过敏反应，如皮疹、荨麻疹、多形性红斑等。大观霉素可损害第八对脑神经，有肾脏毒性及对神经肌肉的阻断作用。不规范用药可导致在动物组织或其产品中残留，不仅影响动物性产品的加工生产，而且还会严重影响消费者的身体健康。欧盟2002年颁布了关于大观霉素和林可霉素在组织中的最大残留限量(残留标示物均为原形)。所有食品动物的肌肉、脂肪、肝、肾、奶中大观霉素的最大残留限量分别为300μg/kg，500μg/kg，1000μg/kg，1500μg/kg，200μg/kg，绵羊肝脏中大观霉素的最大残留限量为2000μg/kg；林可霉素在牛/羊/猪/禽的肌肉、脂肪、肝、肾中最大残留限量分别为100μg/kg，50μg/kg，500μg/kg和1500μg/kg，在牛奶中最大残留限量为150μg/kg。中国农业部于2003年颁布了关于大观霉素和林可霉素在组织中的最大残留限量。大观霉素在牛/羊/猪/鸡的肌肉、脂肪、肝、肾、奶和蛋中最大残留限量分别为500μg/kg、2000μg/kg、2000μg/kg、5000μg/kg、200μg/kg和2000μg/kg；林可霉素在牛/羊/猪/禽的肌肉、脂肪、肝和肾中最大残留限量分别是100μg/kg、100μg/kg、500μg/kg和1500μg/kg，在牛奶中最大残留限量为150μg/kg，在鸡蛋中最大残留限量为50μg/kg。目前还没有国家或组织规定克林霉素的最大残留限量，但由于其具有与林可霉素类似的毒副作用，也有必要加强残留监控。目前使用的方法对仪器设备和技术要求较高。目前有针对单种药物残留检测的方法报道，对于大观霉素以HPLC法和HPLC-MS/MS法为主，对于林可霉素和克林霉素以HPLC-MS/MS法为主。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种林可胺类和大观霉素药物的残留分析方法，本发明的方法与柱前衍生化方法有关。本发明是在以硅烷基化试剂为衍生化试剂进行柱前衍生化，后经气相色谱质谱检测分析，林可霉素、克林霉素及大观霉素与硅烷基化试剂的反应产物更容易气化，即该方法的灵敏度更高。

后经GC-MS在多种残留物同时存在的情况下对某种特定的残留物进行定性、定量分析，检测限可达到5μg/kg，它与HPLC法相比，假阳性率低，检测灵敏度更高。

本发明方法所述的衍生化试剂为硅烷基化试剂，该物质与林可霉素、克林霉素及大观霉素发生衍生化反应具有反应快速，产物易于气化等特点。在75～85℃水浴中，反应0.5～1.5h。衍生化反应的具体条件为：衍生化反应体系中衍生化试剂为硅烷基化试剂；最佳反应温度在75～85℃水浴中；最佳反应时间为0.5～1.5h。

生化反应的方程式如下：-

具体地，本发明的步骤如下所述：

1、林可霉素、克林霉素及大观霉素与硅烷基化试剂的衍生化反应

取经过净化处理的样本溶液在45～50℃下氮气吹干，加甲苯100μL和双三甲基硅基三氟乙酰胺(BSTFA)100μL，加盖旋涡混合，80℃加热衍生1h(盖住盖子)，室温冷却后进行气相色谱-质谱分析。

2、衍生产物气相色谱-质谱测定，技术条件如下：

a)色谱柱：毛细管色谱柱Rtx-5(5％苯基甲基聚硅氧烷)，柱长30m，内径0.25mm。或相当者。

b)进样口温度：280℃

c)进样方式：不分流

d)进样体积：1μL

e)模式：恒流