[发明专利]特非那定在制备斑马鱼心功能损伤模型中的应用

权利要求书

1.特非那定在制备斑马鱼心功能损伤模型中的应用。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤如下：

将受精后2～3天的发育正常的斑马鱼置于含有特非那定浓度为5～20μmol·L^-1的养殖用水溶液中，28℃下恒温培养24～48小时，制得斑马鱼心功能损伤模型。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的养殖用水溶液是向养殖用水中加入二甲基亚砜配制的体积浓度不大于0.5%的溶液。

4.如权利要求2所述的应用，其特征在于，特非那定浓度为5μmol·L^-1。

5.利用斑马鱼心功能损伤模型筛选用于保护心脏的药物的方法，其特征在于，步骤如下：

（1）将受精后2～3天的发育正常的斑马鱼置于含有特非那定浓度为5～20μmol·L^-1的养殖用水溶液中，28℃下恒温培养4～24小时后，加入待测化合物，使待测化合物浓度为0.1～1000μmol·L^-1，继续培养20～24小时，得到给药斑马鱼；

或者，将受精后2～3天的发育正常的斑马鱼置于含有特非那定浓度为5～20μmol·L^-1、待测化合物浓度为0.1～1000μmol·L^-1的养殖用水溶液中，28℃下恒温培养24～48小时，得到给药斑马鱼；

（2）将步骤（1）制得的给药斑马鱼用质量浓度为0.3‰的三卡因麻醉，然后用3%甲基纤维素固定于载玻片上，在显微镜下观察斑马鱼心脏形态，或者，显微镜下观察记录斑马鱼心率和测量动脉球-静脉窦距离；

（3）取斑马鱼心功能损伤模型，用质量浓度为0.3‰的三卡因麻醉，然后用3%甲基纤维素固定于载玻片上，在显微镜下观察模型斑马鱼心脏形态，或者，显微镜下观察记录模型斑马鱼心率和测量动脉球-静脉窦距离；

（4）将步骤（2）得到的斑马鱼心脏形态与步骤（3）得到的模型斑马鱼心脏形态进行比较；待测化合物组的斑马鱼心脏水肿面积和血细胞淤积面积与心脏损伤模型组的心脏水肿面积和血细胞淤积面积相比减少20%以上或者与溶剂对照组/空白对照组的心脏水肿面积和血细胞淤积面积相当，则待测化合物具有心脏保护作用；

或者，将步骤（2）得到的斑马鱼心率和测量动脉球-静脉窦距离长度数据与步骤（3）得到的模型斑马鱼心率和测量动脉球-静脉窦距离长度进行比较；经统计分析后，化合物处理组的心率与心脏损伤模型组的心率相比升高且满足统计学上的p值＜0.05，动脉球-静脉窦距离缩短且满足统计学上的p值＜0.05，则待测化合物具有心脏保护作用。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中特非那定浓度为5μmol·L^-1。

7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中养殖用水溶液是向养殖用水中加入二甲基亚砜配制的体积浓度不大于0.5%的溶液。

8.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）或步骤（3）中，显微镜下观察的温度为25℃。

9.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）或步骤（3）中，心脏形态为心包水肿形态和心脏出血形态。

10.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）或步骤（3）中，测量动脉球-静脉窦距离的方法如下，使待测量斑马鱼胚胎呈侧卧状态，使两侧眼、体节重合，尾部与身体处于同一水平面，通过体视显微镜的目镜中的测微尺测量动脉球与静脉窦之间的距离。