[发明专利]特非那定在制备斑马鱼心功能损伤模型中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及特非那定在制备斑马鱼心功能损伤模型中的应用，特别涉及利用特非那定制备斑马鱼心功能损伤模型，用于筛选心脏保护作用药物中的应用，属于药物筛选技术领域。

背景技术

心功能损伤是各种心脏腔室结构改变或心肌受损所导致心脏功能进行性障碍综合征。临床表现为心脏扩大、心律失常及心力衰竭等。心功能损伤是心脏整体机能异常的综合反映。病毒感染、自身免疫反应、遗传、药物中毒和代谢异常等都可以引起心功能损伤。开发具有防止、延缓心功能损伤的发生和/或缓解临床心功能损伤症状作用的药物，将会带来显著的经济和社会效益。

药物筛选是发现、开发药物过程中的一个重要的环节，实验动物心功能损伤模型的建立对评价和筛选心功能损伤预防/治疗药物至关重要。目前，心功能损伤动物模型以啮齿类为主的哺乳动物体内评价模型，大多采用冠状动脉结扎手术，建立大鼠心功能损伤动物模型。哺乳动物体内评价模型可从整体水平直观地反映药物的心脏保护作用，但不适合新药研发早期药物毒性的高通量筛选。由于哺乳类动物模型建模方法的局限性，越来越多的研究人员使用斑马鱼进行药物心功能损伤的评价。

据文献报道，利用斑马鱼模型进行化合物心功能损伤评价实验的研究结果表明，斑马鱼与哺乳动物的心脏对药物的反应非常相似[Sukardi H,Chng HT,Chan EY,Gong Z,Lam SH.Zebrafish for drug toxicity screening:bridging the in vitro cell-based models and in vivo mammalian models.Expert Opin.Drug Metab.Toxicol.2011,7(5):579-589.]。斑马鱼个体小，成鱼体长3-4厘米，样品用量少；斑马鱼基因组与人类基因组同源性达到85%左右；易于养殖，养殖成本低；体外发育，胚胎透明，胚胎发育快，受精后48小时，心脏就已经发育成熟；产卵量大，每对亲鱼每周可产200-300个卵，利于大规模的检测。斑马鱼的心脏包含心房、心室和静脉窦，心电图谱也与哺乳动物类似，这说明利用斑马鱼建立心功能损伤模型切实可行。

然而，目前将斑马鱼用来心功能损伤评价都是基于正常的斑马鱼。方芳等[方芳，赵杰，余林中，罗佳波。乌头碱对斑马鱼心脏毒性的初步研究。中药药理与临床，2012,28（2）：31-33.]观察了乌头碱对斑马鱼心脏的影响，王思锋等[王思锋，刘可春，王希敏，何秋霞，韩利文，侯海荣。雷公藤红素对斑马鱼胚胎心脏毒性的初步研究。中国药理学通报，2009，25（5）：634-636。]研究了雷公藤红素对斑马鱼心脏的损伤作用。他们都是以正常发育的2天的斑马鱼为模型，观察斑马鱼心脏形态和心率的变化。该方法的优势是根据斑马鱼心脏形态和心率的变化能够直接快速的发现化合物潜在的致心脏功能受损特性。但是在药物筛选过程中，致心功能受损特性大多属于副作用，要尽可能避免。因此，心功能损伤模型在药物筛选领域应用对于筛选具有保护心脏作用的药物可能更有意义。然而感到遗憾的是，在斑马鱼这个新生模式生物上尚未建立一个稳定并被认可的心功能损伤模型。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，本发明的目的之一是提供特非那定在制备斑马鱼心功能损伤模型中的应用。本发明的目的之二是利用建立的斑马鱼心功能损伤模型，筛选、定性或定量评价用于保护心脏的药物的方法。

特非那定在制备斑马鱼心功能损伤模型中的应用。

上述应用，步骤如下：

将受精后2～3天的发育正常的斑马鱼置于含有特非那定浓度为5～20μmol·L^-1的养殖用水溶液中，28℃下恒温培养24～48小时，制得斑马鱼心功能损伤模型。

根据本发明优选的，所述的养殖用水溶液是向养殖用水中加入二甲基亚砜配制的体积浓度不大于0.5%的溶液。

根据本发明优选的，特非那定浓度为5μmol·L^-1。

利用上述制备斑马鱼心功能损伤模型筛选用于保护心脏的药物的方法，步骤如下：

（1）将受精后2～3天的发育正常的斑马鱼置于含有特非那定浓度为5～20μmol·L^-1的养殖用水溶液中，28℃下恒温培养4～24小时后，加入待测化合物，使待测化合物浓度为0.1～1000μmol·L^-1，继续培养20～24小时，得到给药斑马鱼；