[发明专利]检测罗丹明B的胶体金检测卡、其制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及食品安全的快速检测技术领域，具体地，本发明涉及一种快速检测罗丹明B的胶体金检测卡的制备方法、由此制得的胶体金检测卡及应用。

背景技术

罗丹明B（Rhodamine B）又称玫瑰红B或碱性玫瑰精，俗称花粉红，是一种具有鲜桃红色的人工合成染料。罗丹明B在溶液中有强烈的荧光，用作实验室中细胞荧光染色剂、有色玻璃、特色烟花爆竹等行业。

罗丹明B具有脂溶性，曾被用作食品染色和添加剂，主要是辣椒面和辣椒油的染色剂。虽然国家禁止食品中添加罗丹明B，但自2011年起，发生了多起罗丹明B食品安全事件。使用了被污染的调味品制作食品时会造成残留，经试验证明罗丹明B具有潜在的致癌和致突变性。

因此，有必要对食品中的罗丹明B进行检测。目前采用较多的方法为高效液相色谱法，该方法具有很好的灵敏度和特异性，但操作繁琐、耗时长，不适于对大批量样品的检测，且需要昂贵的仪器设备，检测成本高，因此需要提供一种能够快速、简便且灵敏地检测食品中罗丹明B的方法。

发明内容

本发明提供了一种快速检测罗丹明B的胶体金检测卡的制备方法，其制备工艺简单，成本低，且制得的胶体金检测卡能够满足现场快速检测的需要，检测快速，携带方便，操作简单，无需特殊设备和仪器。另外，本发明还提供了利用本发明的胶体金检测卡检测罗丹明B的方法。

一方面，本发明提供了一种检测罗丹明B的胶体金检测卡的制备方法，其包括制备金标垫8，所述金标垫8的制备包括：用含金标抗罗丹明B单克隆抗体的金标蛋白工作液喷涂金标垫，其中所述金标蛋白工作液包含体积比为0.5%～2%的SDS-L（例如体积比1%～2%的SDS-L，例如体积比1%的SDS-L）和0.02M磷酸盐缓冲液。

在一个实施方式中，所述金标蛋白工作液还包含0.1‰g/ml PVA、0.1‰g/ml BSA、0.3‰g/ml PEG20000和5%g/ml蔗糖。

在一个实施方式中，所述金标抗罗丹明B单克隆抗体的制备包括：

A.使用0.01%g/ml氯金酸水溶液和1%g/ml柠檬酸钠水溶液制备胶体金溶液，其中0.01%g/ml氯金酸水溶液：1%g/ml柠檬酸钠=（10～1000）mL：（0.2～20）mL；

B.用所制备的胶体金溶液标记罗丹明B单克隆抗体，其中所使用的胶体金溶液：0.75mg/mL罗丹明B单克隆抗体：1%g/ml PEG20000：10%g/ml BSA=（10～1000）mL：（150～15000）μg：（1～100）mL：（1～100）mL。

具体地，按照0.8cm*30cm金标垫对应金标抗罗丹明B单克隆抗体工作液（浓缩金标抗罗丹明B单克隆抗体按1：2～1：5的体积比用金标蛋白工作液稀释）0.7mL的用量，用1mL移液枪将金标抗罗丹明B单克隆抗体工作液均匀喷涂于金标垫上，置于35℃真空干燥后备用。

在一个实施方式中，胶体金溶液制备中0.01%g/ml氯金酸水溶液：1%g/ml柠檬酸钠=100mL：2mL，用所制备的胶体金溶液标记罗丹明B单克隆抗体中所使用的胶体金溶液：0.75mg/mL罗丹明B单克隆抗体：1%g/ml PEG20000：10%g/ml BSA=100mL：1.5mg：10mL：10mL。

在一个实施方式中，所述方法还包括制备硝酸纤维素膜7，所述硝酸纤维素膜7的制备包括在硝酸纤维素膜上喷涂罗丹明B抗原溶液和羊抗鼠IgG溶液，形成两条平行线作为检测线10和质控线11，其中罗丹明B抗原溶液为含罗丹明B抗原的pH为7.2的0.02M的磷酸盐缓冲液，且10.7mg/mL罗丹明B抗原的体积：0.02M的磷酸盐缓冲液的体积为1：30至1：42，例如1：35，羊抗鼠IgG溶液为含羊抗鼠IgG的pH为7.2的0.02M磷酸盐缓冲液，且7.5mg/mL羊抗鼠IgG的体积：0.02M的磷酸盐缓冲液的体积为1：3至1：5，例如1：4。

在一个实施方式中，所述方法还包括制备样品垫9，所述样品垫9的制备包括用pH7.4的0.05M Tris缓冲液处理样品垫。

在一个实施方式中，所述方法还包括制备

吸水纸6；

将吸水纸6、硝酸纤维素膜7、金标垫8、样品垫9粘贴在底板5上，形成金标试纸条2；

将金标试纸条2装入检测卡壳体1内，使样品垫9的位置正对检测卡壳体1的加样孔3，硝酸纤维素膜7的位置正对检测卡壳体1的观测孔4。

另一方面，本发明提供了由本发明的方法制备的罗丹明B的胶体金检测卡。