[发明专利]作为诊断标记物的外来体相关微RNA

说明书

本申请是申请日为2008年7月25日，申请号为200880025224.0，发明名称为“作为诊断标记物的外来体相关微RNA”的发明专利申请的分案申请。

相关申请

本申请要求以2007年7月25日提交的序列号为60/951,812及2008年5月5日提交的序列号为61/050,438的美国临时申请为优先权基础，这些申请的全部公开内容通过引用的方式纳入本文。

技术领域

本申请公开的主题涉及对癌症和不利妊娠结果诊断和预后的方法。具体而言，本申请公开的主题涉及这样的诊断和预后方法，即这种方法是基于在来自一个受试者的生物样品中确定与癌症或不利妊娠结果相关的一种或多种源自外来体（exosome）的微RNA（microRNA）的量。

背景技术

对适合于癌症的早期检测和诊断的癌症生物标记物的鉴定为改善受试者的临床结果提供了很大的希望。对于呈现模糊症状或无症状的受试者或者对于具有相对难以进行物理检查的肿瘤的受试者，这一点尤其重要。虽然有很多尝试针对于早期检测，但是仍几乎没有开发出能在早期阶段诊断癌症的可靠且低成本的筛查试验。

例如，在全世界女性中，卵巢癌仍是第六大常见癌症，每年造成大约125,000例死亡（Sankaranarayanan&Ferlay,2006）。大多数患卵巢癌的女性在晚期被诊断，有75%被诊断为卵巢外疾病（Berek et al.,2003）。与女性相关的其他癌症相比，73%的子宫内膜癌、55%的乳腺癌和50%的宫颈癌被诊断为I期疾病（Menon&Jacobs,2000）。虽然患I期卵巢癌的患者的5年存活率超过90%，但仅21%的晚期卵巢癌患者在初次诊断后存活5年（Berek et al.,2003）。由于在过去的几十年中长期存活没有显著地变化，对于进一步提高卵巢癌的存活率的最大希望在于早期诊断（Menon&Jacobs,2000）。

现在经核准用于卵巢癌检测的唯一生物标记物是CA125，并且从1983年将它引入后，通过ELISA对它定量一直是卵巢癌检测的“黄金标准”。CA125的评估通常被用于疾病管理中，用于疾病检测以及监测疾病的复发；然而，CA125的使用被局限于早期阶段的癌症检测（敏感性为50-60%）。CA125定量仅被核准用于并且一贯被证实用于减轻的监测。CA125对于新生（de novo）卵巢癌检测既不敏感也不特异，这是因为它虽在>50%的患I期疾病的女性中升高，但它在超过80%的患晚期卵巢癌的患者中升高。CA125的特异性很差，这表现为它的升高与良性和恶性的乳房和结肠疾病、腹膜刺激和良性妇产科疾病等有关。

通过显著简化预分析样品的分离并通过与质谱（MS）偶联而促进蛋白组学分析的新策略已被引入用于生物标记物发现的研究。表面增强激光解吸/电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）已受到很多关注，原因是它通过与生物化学不同的蛋白质芯片阵列结合用于解析生物标本中的蛋白质。在一项技术中，通过ELISA检查了4种血清蛋白质，而另一项技术使用患者血清中的7种具体血清组分或总体肽模式的质谱来确定癌症的存在。SELDI-TOF-MS作谱已被成功地用于从对照区分卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌和肝癌。

在区分患卵巢癌的患者与患良性卵巢疾病的患者、健康对照方面，血清的SELDI-TOF-MS作谱已表现出显著好于现用的标准血清标记物CA125。研究已表明，对由SELDI-TOF-MS解析的多种蛋白质的结合物进行选择有可能作为一种诊断方法。用于卵巢癌的有效筛选测试需要达到高敏感性和特异性，并且现行用于分辨峰的不同蛋白组学技术以及计算分析工具会生成不同的结果。这些对SELDI-TOF-MS作谱探索的初步研究是有希望的，并且该观念在一系列不同背景中是可重复的；然而，将该方法转变成为常规诊断试验仍很困难。