[发明专利]一种检测胎膜早破的试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种检测胎膜早破的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括有多孔板以及以下试剂：

A、磁性微球悬液：所述磁性微球为直径0.5μm-2μm的羟基化磁性微球与N-羟基硫代琥珀酸亚胺、碳二亚胺共同交联所得；悬液中磁性微球的浓度为75-85个/μL；

所述磁性微球悬液中含有质量分数0.8-1.2%的牛血清白蛋白、0.03-0.05%的叠氮钠、0.01-0.03%的吐温-20以及8-10mmol/L的磷酸盐缓冲液；

B、藻红蛋白标记的链霉亲和素和生物素标记的抗体检测液：所述生物素为N-羟基琥珀酸亚胺酯；所述抗体为鼠抗人可溶性细胞间粘附分子-1单克隆抗体；生物素标记的抗体的浓度为1.7-2mg/mL；藻红蛋白标记的链霉亲和素浓度为1-2μg/ml；

C、可溶性细胞间粘附分子-1蛋白标准品以及标准品稀释液：所述标准品稀释液含有质量分数为1.2-1.5%的牛血清白蛋白、0.008-0.012%的吐温-20、0.04-0.05%的叠氮钠以及8-12mmol/L的磷酸盐缓冲液。

2.根据权利要求1所述的检测胎膜早破的试剂盒，其特征在于：所述A试剂磁性微球为直径1μm-2μm的羟基化磁性微球与N-羟基硫代琥珀酸亚胺、碳二亚胺共同交联所得；悬液中磁性微球的浓度为80个/μL。

3.根据权利要求1所述的检测胎膜早破的试剂盒，其特征在于：所述A试剂磁性微球悬液中含有质量分数1%的牛血清白蛋白、0.05%的叠氮钠、0.02%的吐温-20以及10mmol/L的磷酸盐缓冲液。

4.根据权利要求1所述的检测胎膜早破的试剂盒，其特征在于：所述B试剂生物素标记的抗体的浓度为2mg/mL。

5.根据权利要求1所述的检测胎膜早破的试剂盒，其特征在于：所述C试剂标准品稀释液含有质量分数为1.5%的牛血清白蛋白、0.01%的吐温-20、0.05%的叠氮钠以及10mmol/L的磷酸盐缓冲液。

6.根据权利要求1所述的检测胎膜早破的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还含有试剂D：样本稀释液；所述样本稀释液含有质量分数为1%的牛血清白蛋白、0.05%的叠氮钠以及10mmol/L的磷酸盐缓冲液。

7.一种权利要求1所述的检测胎膜早破的试剂盒的制备方法，其特征在于步骤如下：

a、磁性微球悬液的制备：先后用去离子水以及活化缓冲液对羟基化微球进行清洗，并将其重悬于活化缓冲液中；先后加入N-羟基硫代琥珀酸亚胺和碳二亚胺，振荡、离心分离得沉淀；所得沉淀用交联缓冲液洗涤后并重悬于磷酸盐缓冲液中，加入牛血清白蛋白以及叠氮钠制得磁性微球悬液；所述活化缓冲液为0.08-0.12mol/L的NaH₂PO₄的溶液；所述交联缓冲液为45-55mmol/L的2-吗啉乙磺酸溶液；

b、抗体的生物素标记：将鼠抗人可溶性细胞间粘附分子-1单克隆抗体离心分离后用NaHCO₃水溶液洗涤，加入N-羟基琥珀酸亚胺酯，N-羟基琥珀酸亚胺酯与鼠抗人可溶性细胞间粘附分子-1单克隆抗体的质量比为1:4-5，混合静置得生物素标记的鼠抗人可溶性细胞间粘附分子-1单克隆抗体；所述NaHCO₃水溶液的浓度为45-55mmol/L；

c、配备标准品稀释液。

8.根据权利要求7所述的检测胎膜早破的试剂盒的制备方法，其特征在于：所述a步骤中活化缓冲液为0.1mol/L的NaH₂PO₄的溶液；所述交联缓冲液为50mmol/L的2-吗啉乙磺酸溶液。

9.根据权利要求7所述的检测胎膜早破的试剂盒的制备方法，其特征在于：所述b步骤中NaHCO₃水溶液的浓度为50mmol/L。

10.根据权利要求7所述的检测胎膜早破的试剂盒的制备方法，其特征在于：所述c步骤中标准品稀释液含有质量分数为1.5%的牛血清白蛋白、0.01%的吐温-20、0.05%的叠氮钠以及10mmol/L的磷酸盐缓冲液。