[发明专利]检测耳聋相关的线粒体T12201C突变试剂盒及应用

说明书

技术领域

本发明属生物技术领域，涉及用于检测与耳聋相关的线粒体DNA T12201C突变的试剂盒，还涉及一种与耳聋相关的线粒体基因突变的检测方法，特别涉及检测线粒体tRNA^HisT12201C突变的方法，以及上述方法或上述的试剂盒在检测与耳聋相关的线粒体DNA T12201C突变中的应用。

背景技术

耳聋是导致言语交流障碍的常见致残疾病，是人类最大的苦难之一。据WHO 2005年估计全球听力残疾人达2.78亿，占世界总人口4.6%；80%的听力残疾人生活在中、低收入国家。耳聋已成为我国严重的健康安全问题，给国家和社会带来巨大负担。 耳聋是一类复杂性疾病，由遗传因素、环境因素或两者相互作用所致。部分耳聋疾病呈母系遗传特征，提示mtDNA异常可能是这些耳聋疾病发病的分子基础之一。线粒体DNA(Mitochondria DNA, mtDNA)突变是引起感音神经性耳聋的重10 要原因之一，这些突变主要位于线粒体12S rRNA和tRNA基因上。位于12S rRNA基因的同质性A1555G和C1494T突变与氨基糖苷类抗生素(Aminoglycoside Antibiotics, AmAn)导致的非综合征型耳聋相关。近两年来，我们课题研究组发现耳聋与线粒体DNA(Mitochondria DNA, mtDNA)突变存在相关性。在世界上发现了由母系遗传的线粒体基因功能缺陷造成耳聋的致病机理。这些基因缺陷包括12S rRNA A1555G、12S rRNA C1494T、tRNA^Ser(UCN) T7505C、 tRNA^Ser(UCN) G7444A、tRNA^Ser(UCN) T7511C、tRNA^HisT12201C、tRNA^Thr G15927A等突变，诠释了母系遗传性耳聋的发病机制，为耳聋的早期诊断、干预和防治提供了新的理论依据。

自发现与mtDNA突变相关的疾病以来，检测线粒体突变位点的检测方法主要还是序列测定。直接测序法是鉴定突变的黄金标准，但该操作繁琐，费用昂贵限制了它的广泛应用。近年来，国内相继报道了检测线粒体突变相关的技术，以满足对线粒体突变进行广泛筛查的需要，如戴朴等人研发的《母系遗传耳聋线粒体基因1555位A→G突变的检测方法及其试剂盒》（公开号：CN1490415），《用于检测母系遗传线粒体耳聋基因A1555G突变的探针及其用途》（公开号：CN1987462），《用于检测母系遗传线粒体耳聋基因C1494T突变的Taqman MGB探针及其用途》（公开号：CN1987463）。这些检测方法虽然在一定程度上降低了成本，但操作步骤还不够简便，不能同时检测出mtDNA A1555G和C1494T突变；从某种程度上来说，检测费用还是偏高，这对许多家庭济困难的人来说仍是一笔不小的开支。博奥生物自主创新研发的晶芯?遗传性耳聋基因诊断芯片试剂盒能快速、高通量筛查已知遗传性耳聋基因突变位点而25 专门设计的，采用了基因芯片的原理，同时检测4个耳聋相关基因（GJB2, GJB3, SLC26A4和12S rRNA）的9个突变热点。但基因芯片检测涉及特殊仪器及大批数据处理分析对实验室设备、环境和操作人员要求较高，且费用昂贵，难以在一般医院或实验室推广使用。传统上，获得耳聋患者基因组DNA的方法是从血液中提取，每人大约需要3～5ml。这种采血方法给很多被检者尤其是婴幼儿带来了一些痛苦和伤害，而且在跨地区传递样本时存在一定的风险和麻烦。因此，迫切需要一种对人体无伤害、无痛苦的获取耳聋患者基因组DNA的方法以及一种快速、简便、准确、经济的药物性耳聋相关基因突变检测方法，以满足对mtDNA突变进行广泛筛查的需要。

发明内容   

本发明的目的是针对目前检测tRNA^HisT12201C突变的方法所存在的缺点，提供一种快速、简便、准确、经济的检测耳聋相关的线粒体DNA T12201C突变的试剂盒。