[发明专利]桃色顶孢霉S2915及其抗真菌活性蛋白的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物菌株和微生物源蛋白，尤其是涉及一种桃色顶孢霉S2915及其抗真菌活性蛋白的制备方法。

背景技术

真菌不仅是人和其他动物致病的重要病原，而且是农业生产上作物病害和食品污染的重要根源。在世界范围内，由于真菌致病菌造成的主要粮食和经济作物减产达到了20%（[1]Oerke E C.(2006).Crop losses to pests[J].Agric Sci14(4):31-43），因此从自然环境中寻找新的抗真菌药物用以解决严重危害农业生产的真菌病成为了研究热点之一。针对以前所使用药物或者化学制剂的局限性，对未来发展新药提出了一些新的要求：药物在体内保持一定的稳定性，能够低成本地可持续生产，抗菌效果好且对人体无毒副作用。

长期使用化学农药对环境和农药施用者的健康威胁较大，破坏农田生态系统，影响农业资源的可持续利用。相对于化学合成农药，抗真菌蛋白因抗菌谱广且对耐药菌株具有良好的杀菌作用，因而受到广泛关注。抗真菌蛋白来源广泛，哺乳动物、昆虫、两栖动物、细菌和真菌以及植物都是相关来源（[2]De Lucca A J,Walsh T J.(1999).Antifungal peptides:novel therapeutic compounds against emerging pathogens[J].Antimicrob Agents Chemother43(1):1-11）。目前已分离得到多种抗菌蛋白，包括PR-蛋白、类甜蛋白、葡聚糖酶、蛋白酶抑制剂、核糖体失活蛋白、几丁质酶、类几丁质蛋白、类亲环蛋白、非特殊脂转移蛋白和富含甘氨酸/组氨酸蛋白（[3]Wang H X,Ng T B.(2001).Purification of allivin,a novel antifungal protein from bulbs of the round-cloved garlic Life Sci70(3):357-365）。PR-蛋白是植物受到病原微生物侵染时高度表达的一种防御蛋白复合体，目前已从不同的植物及组织中分离到多种具有抗菌活性的蛋白（[4]Bertini L,Caporale C,Testa M,et al.(2009).Structural basis of the antifungal activity of wheat PR4proteins[J].FEBS Lett583(17):2865-2871）。

微生物和植物生长息息相关，微生物来源的抗真菌蛋白在植物防御中也发挥着重要的作用（[5]Ganz,T.(2003).Defensins:antimicrobial peptides of innate immunity[J].Nat Rev Immunol3(9):710-720）。其中，青霉属和曲霉属是丝状真菌中目前发现的仅有的产抗真菌蛋白的两个属。曲霉属中的巨大曲霉、黑曲霉和棒曲霉分别能够产生AFP、AnAFP以及AcAFP等抗菌蛋白。对这类丝状真菌来源的抗真菌蛋白敏感的真菌主要有镰刀菌属、犁头霉属、被孢霉属、根毛霉属、根霉菌属、曲霉属、青霉属、毛霉菌属、地丝菌属、丝衣霉属、葡萄孢属、链格孢属、木霉属、稻瘟病菌以及马铃薯晚疫病菌等不同种属的真菌（[5]Ganz,T.(2003).Defensins:antimicrobial peptides of innate immunity[J].Nat Rev Immunol3(9):710-720；[6]Kovacs L,Viragh M,Tako M,et al.(2011).Isolation and characterization of Neosartorya fischeri antifungal protein(NFAP)[J].Peptides32(8):1724-1731；[7]Skouri-Gargouri H,Ben Ali M,Gargouri A.(2009).Molecular cloning,structural analysis and modelling of the AcAFP antifungal peptide from Aspergillus clavatus[J].Peptides30(10):1798-1804.）。

抗真菌蛋白与当前临床使用药物具有不一样且独特的作用机制，因而倍受青睐。抗菌肽（蛋白）的治疗比目前广泛使用的抗生素治疗方法具有一些明显的优点，因此被认为是未来临床医学的替代药品。目前，利用基因工程技术在植物体表达各种不同来源的抗菌肽(蛋白)使转基因作物获得对致病菌的拮抗作用已取得一定的进展。