[发明专利]一种感染能力增强的重组嵌合型丙型肝炎病毒株

权利要求书

1.一种氨基酸序列，其包括来自丙型肝炎病毒1b基因型的结构蛋白Core、E1、E2、p7和非结构蛋白NS2的第一个跨膜区，其特征在于，所述氨基酸序列具有与SEQ ID NO:1-4中任何一条具有90%以上同源性的氨基酸序列，并且所述氨基酸序列具有选自以下至少一项条件或其任意组合：

从N末端的氨基酸残基起算，第38位氨基酸为S；第180位氨基酸为T；第183位氨基酸为P；第184位氨基酸为R；第217位氨基酸为T；第253位氨基酸为F；第290位氨基酸为P；第364位氨基酸为T；第365位氨基酸为A；第397位氨基酸为R、第398位氨基酸为D；第405位氨基酸为L；第415位氨基酸为S；第416位氨基酸为A；第476位氨基酸为T；第531位氨基酸为G；第532位氨基酸为S；第785位氨基酸为E；第827位氨基酸为V；第835位氨基酸为C；第837位氨基酸为L。

2.如权利要求1所述的氨基酸序列，存在选自以下的至少一项条件：

(i)从N末端的氨基酸残基起算，相应于SEQ ID NO:1序列的第364位氨基酸为T、第476位氨基酸为T、第531位氨基酸为G；或

(ii)从N末端的氨基酸残基起算，相应于SEQ ID NO:1序列的第290位氨基酸为P、第476位氨基酸为T、第531位氨基酸为G；或

(iii)从N末端的氨基酸残基起算，相应于SEQ ID NO:1序列的第180位氨基酸为T、第837位氨基酸为L；或

(iv)从N末端的氨基酸残基起算，相应于SEQ ID NO:1序列的第38位氨基酸为S、第183位氨基酸为P、第184位氨基酸为R、第217位氨基酸为T、第365位氨基酸为A；第405位氨基酸为L、第415位氨基酸为S、第532位氨基酸为S、第785位氨基酸为E，第827位氨基酸为V。

3.如权利要求2所述的氨基酸序列，其特征在于，(i)中，还包括：从N末端的氨基酸残基起算，相应于SEQ ID NO:1序列的第253位氨基酸为F；或

(ii)中，还包括：从N末端的氨基酸残基起算，相应于SEQ ID NO:1序列的第835位氨基酸为C；或

(iii)中，还包括：从N末端的氨基酸残基起算，相应于SEQ ID NO:1序列的第397位氨基酸为R、第398位氨基酸为D、第416位氨基酸为A。

4.如权利要求1-3所述的氨基酸序列，其特征在于，具有SEQ ID NO:5-11中任一氨基酸序列。

5.编码如权利要求1-4任一项所述的氨基酸序列的多核苷酸，所述的多核苷酸为DNA或RNA。

6.权利要求1-5任一所述的蛋白或编码其的多核苷酸的用途，用于制备重组丙型肝炎病毒株，尤其是感染能力增强的重组嵌合型丙型肝炎病毒株。

7.一种用于制备重组丙型肝炎病毒株的重组病毒质粒，该重组病毒质粒包含权利要求5所述的多核苷酸。

8.如权利要求7所述的重组病毒质粒，其特征在于，还包括丙型肝炎病毒基因组的5’非翻译区、NS2第一跨膜区以外片段编码基因、NS3编码基因、NS4A编码基因、NS4B编码基因、NS5A编码基因、NS5B编码基因和3’非翻译区。

9.如权利要求8所述的重组病毒质粒，其特征在于，所述的丙型肝炎病毒基因组来自与权利要求1-5所述的丙型肝炎病毒蛋白或核酸来源不同的另一株丙型肝炎病毒；较佳地，所述的另一株丙型肝炎病毒是JFH-1株。

10.一种制备具有体外复制感染能力的重组嵌合型丙型肝炎病毒的方法，其特征在于，所述方法包括：

(a)提供如权利要求7-9任一项所述的重组病毒质粒；

(b)将步骤(a)的重组病毒质粒在体外转录合成RNA后，转染病毒包装细胞，培养经转染的病毒包装细胞，获得重组嵌合型丙型肝炎病毒株。

11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述的病毒包装细胞是人肝癌细胞系；较佳地，所述的病毒包装细胞包括但不限于：Huh7.5.1细胞、Huh7细胞，HepG2、IMY-N9；较佳地所述的病毒包装细胞为Huh7.5.1细胞。