[发明专利]干细胞样肺癌细胞制备及其抗原组合物负载树突状细胞的方法与试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及制备干细胞样肿瘤细胞、其抗原组合物、负载该抗原树突状细胞的方法、使用所述方法的试剂盒、以及通过所述方法获得的树突细胞和疫苗特别地，本发明涉及制备干细胞样肺癌细胞及其抗原组合物负载该抗原树突状细胞的方法、使用所述方法的试剂盒、以及通过所述方法获得的树突细胞疫苗。背景技术

目前，现有技术已经在肺癌瘤中鉴定并分离到了具有干细胞/祖细胞特性的致瘤肺癌细胞。例如，“Side population in human lung cancer cell lines and tumors is enriched with stem-like cancer cells(人肺癌细胞系和肿瘤中亚群中富含干细胞样肿瘤细胞)”，Maria M.Ho等人，Cancer Research(癌症研究)，第67卷第10期，第4827-4833页，2007年5月15日中公开了，其发现乳腺癌耐药蛋白ATP结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)的细胞，专门保持致癌的活性并且显示出了干细胞样特性。即现有技术可以通过检测癌瘤处分离的疑似干细胞样肺癌细胞的ABCG2或Prominin1，来鉴定干细胞样肺癌细胞。

但是在正常细胞中也有同样的ABCG2和Prominin1的性质，因此现有技术的方法无法将癌瘤处分离的干细胞样肺癌细胞和正常细胞高效准确的区分开，因而无法迅速有效地富集并体外繁殖干细胞样肺癌细胞。例如，在干细胞样肺癌细胞中特异性表达的蛋白激酶C iota，在肺癌细胞中没有表达，但是在正常的肺泡巨噬细胞中也有表达。

综上如何高效准确地得到干细胞样肺癌细胞，并且能否利用所得的干细胞样肺癌细胞来制备对抗供体中肺癌的疫苗，仍然是亟待解决的问题。

发明内容

为了克服现有技术很难在短时间内高效准确得到纯度高且富集容易的干细胞样肺癌细胞的问题，本发明的目的是提供一种制备干细胞样肺癌细胞的方法，该方法可以在短时间内高效准确得到纯度高且富集容易的干细胞样肺癌细胞。

本发明的第提供一种干细胞样肺癌细胞抗原组合物及其负载该抗原树突状细胞的方法，以及提供使用本发明所述方法的试剂盒，通过本发明所述方法获得的树突细胞疫苗。

本发明提供了一种制备干细胞样肺癌细胞的方法，其中，所述方法包括鉴定待测肺癌细胞标本中是否存在干细胞样肺癌细胞的步骤：

所述步骤包括检测所述待测肺癌细胞标本中是否特异表达以下差异蛋白的至少两种：蛋白激酶C iota、五次跨膜单链糖蛋白Prominin1、乙醛脱氢酶1或乳腺癌耐药蛋白ATP结合转运蛋白G超家族成员2。

本发明还提供了一种上述干细胞样肺癌细胞抗原组合物的制备方法，其中，该方法包括以下步骤：

1)按照本发明所述的方法制备干细胞样肺癌细胞，

2)用生理盐水洗涤并重悬所述干细胞样肺癌细胞，

3)裂解所述干细胞样肺癌细胞。

本发明还提供了一种干细胞样肺癌细胞抗原负载的树突状细胞的制备方法，其中，该方法包括：通过裂解干细胞样肺癌细胞得到干细胞样肺癌细胞抗原组合物，将正常树突状细胞与干细胞样肺癌细胞抗原组合物接触得到负载肿瘤抗原的抗肺癌树突状细胞，其中，所述方法包括使用本发明所述的方法制备干细胞样肺癌细胞，或者使用本发明的方法制备干细胞样肺癌细胞抗原组合物。

本发明还提供了一种树突状细胞疫苗，所述树突状细胞疫苗包括树突状细胞，其中，所述树突状细胞为本发明所述的干细胞样肺癌细胞抗原负载的树突状细胞。

本发明还提供了一种制备干细胞样肺癌细胞抗原负载的树突状细胞疫苗的试剂盒，其中，所述试剂盒包括：

1)干细胞样肺癌细胞基础培养基；

2)蛋白激酶C iota、五次跨膜单链糖蛋白Prominin1、乙醛脱氢酶1或乳腺癌耐药蛋白ATP结合转运蛋白G超家族成员2的至少两种；

3)消化细胞的酶；

4)B27或N2、表皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子和胰岛素；

5)树突状细胞基础培养基；

6)巨粒细胞-噬细胞集落刺激因子；

7)白介素-4、干扰素α和肿瘤坏死因子α；以及

6)使用说明书；

其中，所述使用说明书包括本发明所述制备干细胞样肺癌细胞抗原负载的树突状细胞的方法。