[发明专利]一种致敏动物的脾细胞模型及其在药物筛选中的用途

权利要求书

1.一种致敏动物的脾细胞模型，其特征在于，所述的致敏动物的脾细胞模型通过采用空肠弯曲菌CJ-S131诱导建立小鼠SLE样模型，取模型鼠脾脏细胞，用CJ-S131离体刺激，制得SLE样表现的离体模型；该离体模型表现出SLE相关免疫指标升高，所述SLE相关免疫指标包括：抗dsDNA抗体、总IgG、IFN-γ和IL-10。

2.权利要求1所述的致敏动物的脾细胞模型的制备方法，其特征在于，其包括步骤：

采用空肠弯曲菌CJ-S131诱导小鼠产生SLE样症状，按常规方法处理实验小鼠，无菌条件下，制备其脾脏单细胞悬液；在培养板中加入空肠弯曲菌CJ-S131，再次刺激已致敏的脾细胞，制得致敏动物的脾细胞模型。

3.权利要求1所述的致敏动物的脾细胞模型在筛选防治系统性红斑狼疮药物中的用途。

4.按权利要求3所述用途，其特征在于，所述筛选方法包括步骤：

（1）建立SLE相关免疫异常细胞模型：

采用实验动物：正常对照鼠、佐剂对照鼠、CJ-S131诱导的SLE样模型小鼠；常规方法处理实验小鼠，无菌操作将获得的实验小鼠脾脏放入盛有预冷的1640培养液的表面皿中，制得脾单细胞悬液并调节脾细胞浓度，取细胞培养板，分别加入CJ-S131和脾细胞悬液，加板后，混匀，置于37℃、5% CO₂培养箱培养48h；培养结束后，离心，吸取每孔的细胞上清液，分装，放入-80℃冰箱保存，备用；

（2）采用SLE样细胞模型筛选药物

采用实验动物： CJ-S131诱导的SLE样模型小鼠；常规方法处理实验小鼠，无菌操作将获得的实验小鼠脾脏放入盛有预冷的1640培养液的表面皿中，制得脾单细胞悬液并调节脾细胞浓度，取细胞培养板，分别加入待测药物，CJ-S131和脾细胞悬液，加板后，混匀，置于37℃、5% CO₂培养箱培养48h后，离心，吸取每孔的细胞上清液，分装后放入-80℃冰箱保存，检测抗dsDNA抗体、IgG、IFN-γ和IL-10指标；    

（3）抗dsDNA抗体测定：

50μg/ml dsDNA包被酶标板， 4℃过夜； PBS-1%BSA封闭，100μl/孔，37℃ 孵育2h；PBS-T洗涤，加待测细胞培养上清原液，100ul/孔，35C孵育2h；加1:1000稀释的羊抗小鼠IgG-HRP，37℃孵育2h；加1/1000稀释的羊抗兔IgG-HRP酶标抗体， 37℃ 孵育1h；加入OPD底物溶液，37℃避光孵育20min；加入2M H₂SO4终止反应，用酶标仪492nm测定OD；

（4）总IgG测定：

10μg/ml 羊抗小鼠IgG包被酶标板， 4℃过夜；配制纯小鼠IgG标准曲线；取出酶标板，倾去其上清， PBS-1%BSA封闭，100μl/孔，37℃ 孵育2h；分别加入各浓度的纯小鼠IgG或待测细胞培养上清原液，100μl/孔，35C孵育2h， PBS-T洗涤5次，250μl/孔；加1:1000稀释的羊抗小鼠IgG-HRP，100ul/孔，37℃孵育2h；PBS-T洗涤5次，300μl/孔；加1:5000稀释的羊抗小鼠IgG-HRP酶标抗体，100μl/孔，37℃ 孵育2h；PBS-T洗涤4次，300μl/孔；加入OPD底物溶液，100μl/孔，37℃避光孵育20min；加入2M H₂SO₄终止反应，50μl/孔，酶标仪492nm测定OD；

（5）测定细胞培养上清IFN-γ；

（6）测定细胞培养上清IL-10；筛选得到防治系统性红斑狼疮的药物。