[发明专利]一种致敏动物的脾细胞模型及其在药物筛选中的用途

说明书

技术领域

本发明属于药学药物筛选领域，涉及细胞模型及其用途，具体涉及一种致敏动物的脾细胞模型及其在药物筛选中的用途；所述模型可用于建立离体药物筛选，尤其作为筛选防治系统性红斑狼疮（SLE）药物的高通量筛选平台。

背景技术

已知系统性红斑狼疮（SLE）是一种难治的、反复发作、致死率高的严重自身免疫病；虽然所述SLE 的病因和发病机制尚未完全阐明，但患者均存在免疫调节功能严重失调，机体高水平的抗自身抗体和低水平的单核巨噬细胞清除能力，使免疫复合物增多，并广泛性激活补体系统，造成机体的炎症扩大和组织器官损伤，同时使机体对自身抗原的识别长期存在，造成病情的迁延不愈。

有研究报道，针对SLE 患者能检测到多种自身抗体的产生，如抗核抗体，抗双链DNA 抗体（抗dsDNA抗体），抗组蛋白抗体等；且由于其免疫调节障碍，能引起丙种球蛋白升高，以及相关细胞因子分泌的改变，如干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-10（IL-10）和白细胞介素-17 （IL-17）等的水平升高。

目前，国内外抗SLE 药物研究中采用的动物模型有自发性的SLE 模型（如MRL/lpr）和空肠弯曲菌诱导的实验性模型等，上述模型证实了环境因素对免疫耐受的维持和遗传因素起着同样至关重要的作用；但其中所述动物模型的实验周期长，不能实现药物高通量筛选；由于空肠弯曲菌CJ-S131的43KD的热休克蛋白和LPS 均具有与机体自身抗原相似的抗原表位（分子模拟现象），细菌成分作为交叉抗原进入体内，产生应激，引起一系列免疫反应，T细胞活化后通过旁路途径辅助B 细胞多克隆激活，引起自身抗体的产生，使得空肠弯曲菌可诱导小鼠形成具有典型的SLE 样症状，该模型为目前研究SLE 病理机制及寻找治疗药物较理想的模型之一。

柴胡是我国的传统中药和常用中药，其性味苦凉，有疏散退热、疏肝解郁、升阳举气之功效，用于治疗寒热往来，胸满胁痛，口苦耳聋，头痛目眩等。以柴胡为主药的小柴胡汤性较平和，具有和解少阳之功，以清泄枢机之热为特点，有报道用于热毒炽盛型SLE，疗效显著；已有文献（ZhengWang, Hong Li, et al. Beneficial effect of Bupleurum polysaccharides on autoimmune disease induced by Campylobacter jejuni in BALB/c mice. Journal of Ethnopharmacology. 2009; 124: 481-487.）报道，柴胡多糖对SLE 样小鼠具有保护作用，能选择性抑制补体激活，并对小鼠免疫功能具有调节作用。鉴于目前国内外均缺乏离体高通量筛选制备防治系统性红斑狼疮（SLE）药物的方法，本申请的发明人拟提供一种致敏动物的脾细胞模型，并采用所述柴胡多糖验证该脾细胞模型在离体高通量筛药方面的特性，进一步建立离体高通量筛选制备防治系统性红斑狼疮（SLE）药物的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种致敏动物的脾细胞模型及其在药物筛选中的用途。该致敏动物的脾细胞模型实验周期短、能实现药物高通量筛选。

本发明的致敏动物的脾细胞模型通过下述方法制备，采用空肠弯曲菌CJ-S131诱导建立小鼠SLE样模型，取模型鼠脾脏细胞，用CJ-S131离体刺激，制得SLE样表现的离体模型；该离体模型表现出SLE相关免疫指标升高，所述SLE相关免疫指标包括：抗dsDNA抗体、总IgG、IFN-γ和IL-10。

更具体的，本发明的致敏动物的脾细胞模型的制备方法，其特征在于，其包括步骤：

采用空肠弯曲菌CJ-S131诱导小鼠产生SLE样症状，按常规方法处理实验小鼠，无菌条件下取其脾脏，制备单细胞悬液；在培养板中加入空肠弯曲菌CJ-S131，再次刺激已致敏的脾细胞，制得致敏动物的脾细胞模型。

本发明进一步采用具有抗SLE作用的药物柴胡多糖，验证上述离体模型在药物筛选中的用途，尤其是在制备防治系统性红斑狼疮药物中的用途。

本发明中，在制得的脾细胞模型中加入不同浓度的待测药物柴胡多糖，置于37℃、5% CO₂培养箱培养48h；培养结束后，吸取培养板中的细胞培养上清，检测抗dsDNA抗体、总IgG、IFN-γ和IL-10等疾病相关免疫学指标，结果显示，SLE相关病变指标中，细胞培养上清液中抗dsDNA抗体、总IgG、相关炎症因子IFN-γ和IL-10水平明显升高；

结果表明，采用本发明制得的脾细胞模型可用于筛选防治系统性红斑狼疮（SLE）的药物。