[发明专利]一种葡萄霜霉病菌的快速分子检测方法与应用

权利要求书

1.一种葡萄霜霉病菌的快速检测方法，其特征在于由以下步骤构成：

(1)五条葡萄霜霉病菌的特异性LAMP引物，序列分别为：

FIP：5’-GAAGCCAACCATACCGCAAATCGGCGACCAATTTATTTGCTGTTG-3’；

BIP：5’-GAATCGGTGAACCGTAGCTATATGTAAGCTGCCACTCTACTTCG-3’；

F3：5’-GTTTGTCTATTGTGGCCAGTC-3’；

B3：5’-CCAAATGGATCGACCCTCG-3’；

LB：5’-GACTATGCTTTCAATCAGTTT-3’；

(2)葡萄霜霉病菌的快速分子检测体系的建立，其步骤包括：

1)从被测样品材料中抽提葡萄霜霉病菌基因组DNA；

2)LAMP扩增反应体系25μL：包含2.5μL10×ThermoPol Reaction buffer，8mM MgCl₂，1.4mM dNTP，1M Betain，1.4μM内引物FIP和BIP，0.2μM外引物F3和B3，1.4uM LB环引物，8U Bst DNA聚合酶大片段，1μL模板DNA，ddH₂O3.4μL；反应程序：65℃恒温反应30min；

3)产物检测：反应完成后，取出PCR管，对着光用肉眼观察浊度或400nm光下使用浊度仪检测浊度就能判定结果，或者取5μL LAMP产物用1.5％琼脂糖凝胶电泳分离130V30min，经溴化乙锭染色后于紫外灯下根据梯形条带的有无判定结果，或向PCR管内加入2μL 1000×SYBRGreenI染料后于紫外灯下根据绿色荧光的有无判定结果。

2.权利要求1中所述的葡萄霜霉病菌的LAMP快速检测方法在检测葡萄霜霉病菌中的应用，其特征在于该检测方法可应用于检测叶片组织中葡萄霜霉病菌，检测酿酒、鲜食葡萄品种组织内霜霉菌，检测有核、无核品种葡萄组织内霜霉菌，检测不同地区的相同葡萄品种霜霉菌，检测相同地区的不同葡萄品种霜霉菌，检测不同地区的不同葡萄品种霜霉菌。