[发明专利]一种钴离子比色法检测试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及环境和生物分析技术领域，具体的说是一种钴离子比色法检测试剂盒及其检测方法。

背景技术

钴离子作为生物体必需元素之一，在生物体内充当着非常重要的的地位，它是维生素B12的组成成分之一.可能正是这个原因对钴离子的检测的研究并不是很受关注，然而，已经有报道说明当血浆内的钴离子一定浓度时，它就会导致一些严重的疾病。钴以及他的复合物已被指出可能成为病原学毒素并且有致癌的倾向。另外，钴离子作为一种金属离子，不能够被分解，因而具有生物富集和生物放大的效应，这样更加增加了食物链顶端人类的风险，因而对钴离子的检测是非常有必要的。

传统的方法检测钴离子的有原子吸收光谱（AAS），电感耦合等离子体-质谱联用技术（ICP-MS），伏安法等。AAS,ICP-MS都是需要大型仪器，不仅价格昂贵且不适合现场检测，而伏安法相对简单且快速，但经常需要有毒的汞膜电极或者需要复杂的化学修饰电极。相对于以上方法，比色分析法优势在于其肉眼易于观测，非常适合于现场实时检测，操作简单且价格便宜。近年来金纳米粒子被广泛运用比色分析中，这是由金纳米粒子表面等离子体共振吸收使得其良好的摩尔消光系数，本发明利用钴离子催化产生超氧自由基刻蚀金纳米棒实现了高灵敏，快速检测钴离子的目的，以这种方法检测钴离子的方法，目前国内还未见报道。

发明内容

本发明目的在于提供一种钴离子比色法检测试剂盒及其检测方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种钴离子比色法检测试剂盒，试剂盒包括十六烷基溴化铵（CTAB）硼酸盐缓冲液、碳酸氢钠溶、过氧化氢、硫氰酸钾、金纳米棒溶液、标准比色卡F和比色管；

所述含十六烷基溴化铵（CTAB）硼酸盐缓冲液，pH为7.4-9.6，浓度为10-200mM;

所述碳酸氢钠溶液浓度为0.01-1M；

所述H₂O₂溶液浓度为0.01-1M；

所述硫氰酸钾溶液浓度为0.01-1M。

所述所述含十六烷基溴化铵（CTAB）硼酸盐缓冲液中CTAB浓度为0.1-20mM。

进一步的说，所述试剂盒中含十六烷基溴化铵（CTAB）硼酸盐缓冲液pH为9.0，浓度为50mM，含CTAB的浓度为为2mM；金纳米棒溶液为浓度为2.3nM的长径比为2:1的金纳米棒溶液；碳酸氢钠溶液浓度为0.1M；H₂O₂溶液浓度为0.1M；硫氰酸钾溶液浓度为0.1M。

将金纳米棒溶液在6000-10000转/min离心5-30min，收集沉淀并用二次水稀释，稀释后再以5000-9000转/min离心5-30min，沉淀再用二次水稀释，待用。

钴离子比色法检测试剂盒的检测铜离子的方法，将待测样品比色管中、加入含CTAB的硼酸盐缓冲液，加入碳酸氢钠、H₂O₂和硫氰酸钾摇晃混匀，混匀后再加入金纳米棒溶液，摇匀；而后于60-100℃温度下孵育2-20分钟，通过肉眼或紫外可见光谱仪观察颜色，与标准比色卡F对比确定钴离子含量。

进一步的说，将待测样品用含CTAB的硼酸盐缓冲液调节pH，并保持最终体积为800-900μL，加入碳酸氢钠、H₂O₂和硫氰酸钾摇晃混匀，混匀后再加入200-300μL的金纳米棒溶液，摇匀；而后于60-100℃温度下孵育2-20分钟，通过肉眼或紫外可见光谱仪观察颜色，与标准比色卡F对比确定钴离子含量。

所述标准比色卡F的制备是，取0-300nM不同浓度钴标准色阶溶液分别放置于比色管中，加入含CTAB的硼酸盐缓冲液、碳酸氢钠、H₂O₂和硫氰酸钾摇晃混匀，混匀后再加入金纳米棒，摇匀；而后于50-100℃温度下孵育2-30分钟，进行显色反应，使用专业照相机记录显色结果，采集图片后，用有颜色梯度的图片组成钴标准比色卡F。

所述含十六烷基溴化铵（CTAB）硼酸盐缓冲液，pH为7.4-9.6，浓度为10-200mM;所述碳酸氢钠溶液浓度为0.01-1M；所述H₂O₂溶液浓度为0.01-1M；所述硫氰酸钾溶液浓度为0.01-1M。