[发明专利]一种干扰Survivin基因表达的siRNA分子及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种可干扰凋亡抑制因子survivin基因的小分子干扰RNA(siRNA)，及其抗肿瘤的用途。 

背景技术

恶性肿瘤是当前威胁人类生命健康的主要杀手之一，尽管各种的治疗方法不断出现，但目前还没有找到真正有效的根治方法，肿瘤的治疗一直是长期困扰医学界的世界性难题。逃避凋亡是所有肿瘤的特征，它使得肿瘤细胞在异常生长刺激下存活，并抵抗化疗和放疗。抗凋亡蛋白通过与凋亡信号作用成为新的最有潜能的治疗靶标来抑制肿瘤细胞的生长。 

凋亡抑制基因survivin是1997年发现的一种重要的肿瘤相关基因，该基因是在人类基因组文库中筛选克隆到的，它定位于17q25，全长15KB，含4个外显子和3个内含子，基因编码产物为由142个氨基酸组成的蛋白，分子量16.2KD，具有抑制细胞凋亡和调节细胞有丝分裂的双重功能，是联系细胞周期和细胞凋亡界面的重要因子。该基因具有两个突出的特点：(1)几乎在所有种类的肿瘤组织中特异性地表达，而正常组织几乎没有表达；(2)具有抗肿瘤细胞凋亡、促进有丝分裂、调节细胞周期、参与血管形成和放化疗耐受多种功能于一体，是目前发现最强的凋亡抑制因子。Survivin功能复杂，具有抑制细胞凋亡，促进细胞转化并且参与细胞的有丝分裂、血管的生成和肿瘤细胞耐药性的产生等作用。现已发现，Survivin基因在胚胎组织及恶性肿瘤中普遍表达，如乳腺癌、胃癌、肾癌、黑色素癌、肠癌、神经母细胞癌和卵巢癌等；但在分化成熟的组织(除胎盘、增殖期子宫内膜、分泌期子宫内膜有微量表达外)及癌旁正常组织中无表达。它的这一特性，使得Survivin成为免疫治疗、基因治疗和小分子抗肿瘤药物开发的重要靶点。 

RNA干扰(RNA interference，缩写为RNAi)是指一种分子生物学上由双链RNA(double-strtlnded RNA，dsRNA)诱发的基因沉默现象，其机制是通过阻碍特定基因的翻译或转录来抑制基因表达。当细胞中导入与内源性mRNA编码区同源的双链RNA时，该mRNA发生降解而导致基因表达沉默，其原理是：以 RNase III核酶家族的Dicer，与双链RNA结合，将其剪切成21-23nt及3’端突出的小干扰RNA(smallinterfering RNA，siRNA)，随后siRNA与RNA诱导沉默复合物(RNA-induced silencing complex，RISC)结合，解旋成单链，活化的RISC受已成单链的siRNA引导，序列特异性地结合在靶mRNA上并将其切断，引发靶mRNA的特异性分解，从而阻断相应基因表达的转录后基因沉默机制。 

RNAi技术是上世纪末到本世纪初发展的一项崭新技术，该项技术的发现为疾病治疗尤其是癌症的治疗开辟了全新的途径，为科研工作者提供了一个全新的基因治疗理念。用siRNA干扰特定基因的表达是基因治疗的重要组成部分。RNAi已作为一种简单有效的基因敲除的技术，广泛地应用于功能基因组学研究以及抗病毒、抗肿瘤治疗的研究中。应用RNA干扰技术，用靶向至Survivin基因的siRNA作为靶向药物，在基因的转录后进行干扰，从而诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞的有丝分裂，抑制肿瘤转移时的血管形成和降低肿瘤细胞放化疗的耐受性，对肿瘤进行抑制，在不久的将来可能成为一种新的肿瘤治疗方法。 

发明内容

为抑制肿瘤细胞的增殖和转移，本发明公开了一种通过siRNA分子库技术筛选出的高效靶向Survivin基因的双链siRNA分子，其由下述正义链和反义链组成： 

正义链5′-CGUCAUCUGGCUCCCAGCC UUCCX-3′，(SEQ ID NO：1) 

反义链5′-GGAAGGCUGGGAGCCAGAU GACGX-3′，(SEQ ID NO：2)其中X代表tt、TT或UU，t代表脱氧胸腺嘧啶。 

换句话说，该双链siRNA分子的主干序列为 

正义链：5′-CGUCAUCUGGCUCCCAGCCUUCC-3′ 

反义链：5′-GGAAGGCUGGGAGCCAGAUGACG-3′， 

在一个优选的实施方式中，上述序列中3′端的“X”是两个脱氧胸腺嘧啶dTdT。 

本发明的另一目的在于提供上述siRNA分子在制备抗肿瘤药物中的应用。