[发明专利]二维多通道色谱系统及利用其分离和筛选红松松塔萃取物强抗氧化组分的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种色谱系统及利用其分离和富集松塔多酚的方法，具体涉及一种二维多通道色谱系统及利用其分离和富集松塔多酚的方法。

背景技术

红松是一种主要分布于中国东北及周边国家和地区的多年生松科植物。对于松科植物的萃取物的研究已发现松科萃取物具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎症、抗神经退化疾病和抗紫外辐射等作用，其中以法国海岸松的松皮萃取物即碧落芷的研究最为充分，碧落芷已成为国际认可的食品、保健品和化妆品的添加原料。

现在生活中面对着很多的外界有毒物质，这些有毒物质能引起体内形成大量的活性氧，活性氧能造成人体的损伤，研究发现很多的疾病包括肿瘤、心血管疾病等都与体内的活性氧水平有关，因此降低体内活性氧水平和提高体内抗氧化能力是很有必要的，而松萃取物具有很强的抗氧化能力。松萃取物的主要有效成分是多酚、黄酮和原花青素等组分，这些组分都有很强的抗氧化能力，但是不同成分之间对抗氧化活性的贡献是不一致的，因此筛选这些成分中最高的抗氧化组分是有必要的。

大孔树脂对多酚化合物具有高的吸附量，易于解吸附和无毒性，常用于多酚化合物的分离和富集。大孔树脂不仅具有吸附效应，而且还具有毛细管效应、分子筛效应等，能有效的分级分离多酚化合物。但是传统的色谱使用单色谱柱系统，操作时间长，效率低。

发明内容

本发明的目的是提供一种能够高效分离多酚化合物的二维多通道色谱系统及利用其分离和筛选红松松塔萃取物强抗氧化组分的方法。

本发明利用二维多通道色谱系统并结合大孔树脂分离和筛选松塔萃取物强的抗氧化组分，具体步骤如下：

（1）松塔萃取物的制备：红松松塔经40~60℃烘箱干燥12~18h，粉碎机粉碎，过20~50目筛子，然后按照料液比为1：5~10，用40~80%（v:v）乙醇超声辅助萃取0.5~2h，重复1~3次，合并滤液；真空旋转蒸发仪浓缩滤液，测定多酚的浓度，用于筛选最优的大孔树脂。

（2）二维多通道色谱系统：二维多通道色谱系统是将一根单独的色谱柱分割为吸附柱和分离柱，通过对吸附柱和分离柱进行串联和/或并联洗脱，从而实现对多酚化合物的高效快速分离，为了达到更有效的分离，采用一个吸附柱和多个分离柱，具体结构如下：

二维多通道色谱系统由上样柱和若干个分离柱构成，进样管均与上样柱和分离柱连接，上样柱依次连接各个分离柱。

（3）吸附柱水洗：将在柱外完成对多酚吸附的大孔树脂装入吸附柱，用蒸馏水冲洗吸附柱，流速为10~200mL/min，去除没有吸附的多酚化合物和其他杂质，每隔100~300mL收集一次样品，检测样品中的多酚含量，直到多酚含量基本为零，停止蒸馏水洗上样柱。

（4）组分的收集：将预处理好的大孔树脂装入分离柱，吸附柱水洗结束后，分别用20%、30%、40%和50%乙醇串联梯度洗脱吸附柱和分离柱，对吸附柱上吸附的多酚组分进行分离和分布，洗脱流速为10~200mL/min，到多酚出现露点为止，停止洗样，之后并联收集每个分离柱的组分，对每个组分旋转蒸发去除乙醇和浓缩成高浓度溶液，并对每个组分冷冻干燥。

松萃取物具有抗氧化、抗肿瘤和抗辐射等多种功能，其主要成分是多酚、黄酮和原花青素等。大孔树脂对多酚化合物具有高的吸附量、易于解吸附、和无毒性，常用于多酚化合物的分离。本发明采用一种新的二维多通道色谱系统结合大孔树脂分离和筛选松多酚强抗氧化组分。二维多通道色谱系统是将色谱柱分割为吸附柱和分离柱，实现对多酚化合物的高效快速分离，为了达到更有效的分离，采用一个吸附柱和多个分离柱。通过对5种不同理化特征的大孔树脂的筛选，发现弱极性的AB-8大孔树脂是最优的分离介质，对多酚化合物的吸附结果良好拟合假二阶动力学方程和Langmuir和Freundlich吸附等温方程。采用0.5-5.0mg/ml多酚当量的萃取液作为AB-8大孔树脂的吸附溶剂， 20、30、40和50%乙醇溶液作为等梯度解吸附溶剂，每分离柱的1/2BV作为一个收集组分，每柱收集2BV，最终总共收集到64个组分。测定每一个组分的ABTS^·+自由基清除活性，结果50-2.2具有最强的ABTS^·+自由基清除活性，其次是50-2.3和20-2.2。

本发明相对于单柱色谱，能更加高效和快速的分离多酚化合物，其分离速度和效率能明显提高几倍，甚至十几倍，并通过结合抗氧化指标的测定能够快速的筛选功能性组分。

附图说明