[发明专利]生长抑素及其制备方法

权利要求书

1.制备生长抑素的方法，其包括以下步骤：

(a)向经浸泡处理的固相合成用树脂中加入溶解于溶剂中的Fmoc-Cys(Trt)-OH和有机碱，使物料进行反应以形成Fmoc-Cys(Trt)-树脂；

(b)向上一步骤所得的肽偶合树脂中加入脱帽试剂，使物料进行反应以脱帽；接着加入溶解于溶剂中的保护氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH、肽偶联剂、酰胺键形成促进剂和有机碱，使物料进行偶联反应(亦可称为缩合反应)，以形成Fmoc-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂；

(c)循环重复步骤(b)，并在每一循环操作的偶联反应中依次使用下列氨基酸以替换保护氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH：Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Trp-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Gly-OH、Boc-Ala-OH，以最终形成保护的十四肽树脂：Boc-Ala-Gly-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Phe-Phe-Trp-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Cys(Trt)-树脂；

(d)向步骤(c)所得十四肽树脂中加入切割液以同时进行脱保护和切肽反应，以使十四肽从树脂上切割下来并脱除保护基，得到还原型生长抑素；

(e)将步骤(d)所得还原型生长抑素溶解于酸中，加入氧化剂进行氧化反应，得到下式所示生长抑素：

和任选的，

(f)对步骤(e)所得生长抑素进行纯化的步骤。

2.根据权利要求1的方法，其中步骤(a)中，

所述树脂选自：2-氯三苯基醇树脂、rink amide MBHA树脂、rink amide am树脂、knorr树脂、或其组合；

所述树脂浸泡处理是照如下方式进行的：取树脂置于反应器中，加入溶剂(例如二氯甲烷、甲醇、乙醇、氯仿、三氟乙酸、DMF、或其组合)振荡并充分浸泡，抽除溶剂；

所述树脂在经浸泡处理后、进行偶联反应之前，还包括对该树脂进行脱帽处理的步骤；在一个实施方案中，步骤(a)中脱帽试剂是氯化亚砜；在一个实施方案中，步骤(a)中2-氯三苯基醇树脂与氯化亚砜的重量比为1：1～2；和/或

所述有机碱例如但不限于：NMM、DIPEA、三甲基吡啶、或其组合；在一个实施方案中，所述有机碱与树脂的摩尔比为5～7：1；；在一个实施方案中，所述Fmoc-Cys(Trt)-OH与树脂的摩尔比为1～2：1。

3.根据权利要求1至2的方法，其中步骤(b)中，

所述脱帽试剂选自哌啶、二乙胺、三乙胺、三氟乙酸；

所述脱帽反应是在选自下列的溶剂中进行的：二氯甲烷、二甲基甲酰胺；

所述脱帽反应是在25～27%的哌啶/二甲基甲酰胺溶液中进行的，优选是在26%的哌啶/二甲基甲酰胺溶液中进行的；

所述脱帽反应是在32～35°C温度下进行的，反应时间为10～50min；

还包括在完成脱帽反应后对获得的树脂进行清洗的操作，所述清洗是使用选自下列的溶剂清洗处理1～3次、甲醇、乙醇、氯仿、三氟乙酸、DMF、或其组合；和/或

还包括在脱帽反应期间或者脱帽反应后采用茚三酮检测法检测脱帽反应进行程度。