[发明专利]一种利用天津短杆菌和植物乳杆菌混合发酵高产GABA的方法

权利要求书

1.一种利用天津短杆菌和植物乳杆菌混合发酵高产γ-氨基丁酸的方法，其特征是：利用廉价的葡萄糖为原料，通过两步连续发酵生产γ-氨基丁酸，第一步采用谷氨酸生产菌株天津短杆菌SW07-1将葡萄糖转化为谷氨酸，第二步采用全细胞转化的方法，将能产生谷氨酸脱羧酶的菌株L.plantarum GB01-21添加到谷氨酸发酵液，建立稳定的转化体系，催化谷氨酸脱羧形成γ-氨基丁酸。

2.权利要求1中第一步用天津短杆菌SW07-1的发酵谷氨酸的方法，其特征是：将保存菌种接入活化培养基，30℃，220r/min往复式摇床振荡培养12h，再以2％的接种量接种至种子培养基，30℃，220r/min往复式摇床培养12h，再以10％接种量接种至5L发酵罐，发酵罐中装液量为2.5L，通气量3.5L/min，流加氨水控制pH7.0-7.2，根据溶氧需求调节转速400-600r/min，30℃培养36h；最终发酵液中谷氨酸含量约90g/L左右。

3.权利要求1中第二步植物乳杆菌的培养与菌体收集方法，其特征是：将保存菌种接入活化培养基MRS培养基，30℃，静置培养1d，再以12％的接种量接种至装有3L无菌TYG液体培养基的5L发酵罐中，搅拌速度和通气量分别为300r/min、1.25L/min，30℃培养36h，4000r/min离心10min收集菌体。

4.权利要求1中第二步全细胞转化方法，其特征是：按照醋酸缓冲液的配制方法向天津短杆菌谷氨酸发酵液中加入对应量的无水乙酸钠和冰醋酸，构成0.2mol/L，pH5.0的醋酸缓冲体系，同时，将前一步收集到的植物乳杆菌加入到缓冲体系中(添加的菌体量按照植物乳杆菌培养液体积∶谷氨酸发酵液体积＝3∶2来计算)，作为转化体系，搅拌速度和通气量分别为150r/min、0.5L/min，30℃进行转化20h，发酵液中原有谷氨酸转化完毕，继续向转化体系中加入60g/L的外源谷氨酸作为底物，继续转化。

5.权利要求4中的底物与产物的定性与定量分析以及菌体生长情况的监测方法，其特征是发酵液中葡萄糖和谷氨酸的实时检测通过SBA-40B生物传感分析仪测定；γ-氨基丁酸通过氨基酸测定仪测定；利用氨基酸测定仪分别测定标准样品γ-氨基丁酸和转化液各自的出峰时间和峰面积，即可以对转化液中γ-氨基丁酸进行定性与定量检测。