[发明专利]一种用于检测羊传染性脓疱皮炎病毒的试剂盒及其检测方法有效
| 申请号： | 201310199211.8 | 申请日： | 2013-05-27 |
| 公开（公告）号： | CN103255234A | 公开（公告）日： | 2013-08-21 |
| 发明（设计）人： | 刘湘涛;田宏;吴锦艳;陈妍;尚佑军;张克山;尹双辉;王光祥;杨顺利;刘永杰 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院兰州兽医研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;G01N21/64 |
| 代理公司： | 深圳市中知专利商标代理有限公司 44101 | 代理人： | 吕晓蕾 |
| 地址： | 730046 *** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 检测 传染性 皮炎 病毒 试剂盒 及其 方法 | ||
1.一种用于检测羊传染性脓疱皮炎病毒的检测方法，其特征在于，通过针对羊传染性脓疱皮炎病毒的保守区域H2L基因设计一对引物和一条探针对样品的DNA模板进行实时荧光定量PCR检测，所设计引物和和探针序列如下：
上游引物：5’-TCCACGCTGCCGACGCCAAAGT-3’
下游引物：5’-GCACCGCATCGAGAACGCCAAGAA-3’
探针：5’-FAM-TCGAGGCTGCGCGCGGCCGAGACC-TAMRA-3’。
2.根据权利要求1所述的用于检测羊传染性脓疱皮炎病毒的检测方法，其特征在于，所述样品的DNA模板使用宝生物工程有限公司的型号为D824A的基因组DNA提取试剂盒进行提取。
3.根据权利要求2所述的用于检测羊传染性脓疱皮炎病毒的检测方法，其特征在于，所述实时荧光定量PCR的反应体系为：
1)Premix Ex Taq12.5μL；
2)上下游引物及探针，其浓度均为10μM，各取1μL；
3)样品的DNA模板3μL；
4)无RNA酶水6μL；
5）50×ROX Reference Dye0.5μL。
4.根据权利要求3所述的用于检测羊传染性脓疱皮炎病毒的检测方法，其特征在于，所述实时荧光定量PCR的反应条件如下：94℃预变性2min；94℃40s，54℃40s，72℃50s，40个循环。
5.一种用于检测羊传染性脓疱皮炎病毒的试剂盒，其特征在于，包括Premix Ex Taq、阳性对照、阴性对照、扩增引物与探针的混合物以及50×ROX Reference Dye；
所述扩增引物与探针的混合物的序列如下：
上游引物：5’-TCCACGCTGCCGACGCCAAAGT-3’
下游引物：5’-GCACCGCATCGAGAACGCCAAGAA-3’
探针：5’-FAM-TCGAGGCTGCGCGCGGCCGAGACC-TAMRA-3’。
6.根据权利要求5所述的用于检测羊传染性脓疱皮炎病毒的试剂盒，其特征在于，所述阴性对照为无RNA酶水。
7.根据权利要求6所述的用于检测羊传染性脓疱皮炎病毒的试剂盒，其特征在于，所述阳性对照为含有羊传染性脓疱皮炎病毒H2L基因的质粒。
8.根据权利要求7所述的用于检测羊传染性脓疱皮炎病毒的试剂盒，其特征在于，试剂盒中上下游引物及探针的浓度均为10μM，体积配比为1:1:1。
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