[发明专利]一种臭矢菜素A的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于天然药物化学领域，特别是涉及一种臭矢菜素A的制备方法。

背景技术

臭矢菜素A（Cleomiscosin A）为香豆素类物质，CAS号76948-72-6，mp.250-251℃，分子式C₂₀H₁₈O₈，分子量386.36，结构式为

。

臭矢菜素A来源于白花菜科(Capparidaceae) 臭矢菜 Cleome icosandra Linn.种子。研究表明，臭矢菜素A具有细胞毒活性。对P388的ED50为0.4μg/mL或2.8μg/mL，对KB细胞的ED50为4.9μg/mL。臭矢菜素A还具有肝保护活性。在大鼠肝细胞培养中，在本品0.1mg/mL浓度时，对由D－半乳糖胺所致的肝中毒使谷丙转氨酶(GPT)从对照组的100%降至68%(P<0.001)。

通过文献检索，国内尚未见从臭矢菜种子制备臭矢菜素A的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种臭矢菜素A的制备方法，工艺简单、提取率高，整个过程具有安全、无毒等优点。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

a.取臭矢菜种子，加入超临界萃取釜中，乙醇为夹带剂，在萃取压力22-28MPa、温度45-60℃的条件下，通入液态CO₂萃取30-100min，在压力7-8MPa，温度30-45℃解析得萃取物；

b.上述萃取物用甲醇溶解，加少量硅胶拌样，挥干溶剂，干法上柱，石油醚-乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱，收集洗脱液减压浓缩得粗提物；

c.上述粗提物采用高速逆流色谱分离，紫外检测器监测，收集目标成分，冷藏结晶，得臭矢菜素A。

步骤a中所述CO₂流量为3.5-5ml/g生药/min，夹带剂用量为总萃取溶剂的12-15%。

步骤b中所述硅胶为200目，石油醚-乙酸乙酯体积比为13-1:3。

步骤c中所述高速逆流色谱的溶剂系统为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水组合，比例为3-5:5-9:3-4:2-5，下相为流动相，上相为固定相。

本发明的积极效果是：

1.采用超临界CO₂萃取，高效无溶剂残留，对环境无污染；

2.采用硅胶柱纯化，操作简单，处理量大；

3.采用高速逆流色谱分离，分离速度快，样品无损失，溶剂可以循环使用，适合连续制备。

具体实施方式：

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明。

实施例1：

臭矢菜种子，取1kg加入超临界萃取釜中，通入液态CO₂，设置萃取压力25MPa、温度45℃，达到上述参数后，调整液态CO₂流量为4ml/g生药/min，夹带剂用量为总萃取溶剂的12%，动态萃取120min，在压力7MPa、温度40℃下解析，所得萃取物加甲醇溶解后，加少量硅胶拌样，挥干溶剂，干法上柱，石油醚-乙酸乙酯11:3、6:3、1:3混合溶剂梯度洗脱，收集目标洗脱液，减压浓缩得粗提物。取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按3:9:4:5混合，混合充分分层后，取上相注满高速逆流色谱柱，同时开转主机850rpm，泵入下相做流动相，待系统平衡后，流速调节为2.5ml/min，同时用固定相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器监测，收集目标流分，连续制备，冷藏流分，得结晶物，经HPLC检测，纯度98.4%。

实施例2：

臭矢菜种子，取2kg加入超临界萃取釜中，通入液态CO₂，设置萃取压力22MPa、温度50℃，达到上述参数后，调整液态CO₂流量为3.5ml/g生药/min，夹带剂用量为总萃取溶剂的15%，动态萃取50min，在压力9MPa、温度45℃下解析，所得萃取物加甲醇溶解后，加少量硅胶拌样，挥干溶剂，干法上柱，石油醚-乙酸乙酯13:3、4:3、1:3混合溶剂梯度洗脱，收集目标洗脱液，减压浓缩得粗提物。取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按5:5:3:2混合，混合充分分层后，取上相注满高速逆流色谱柱，同时开转主机900rpm，泵入下相做流动相，待系统平衡后，流速调节为3ml/min，同时用固定相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器监测，收集目标流分，连续制备，冷藏流分，得结晶物，经HPLC检测，纯度98.2%。

实施例3：

臭矢菜种子，取20kg加入超临界萃取釜中，通入液态CO₂，设置萃取压力28MPa、温度60℃，达到上述参数后，调整液态CO₂流量为5ml/g生药/min，夹带剂用量为总萃取溶剂的13%，动态萃取100min，在压力8MPa、温度30℃下解析，所得萃取物加甲醇溶解后，加少量硅胶拌样，挥干溶剂，干法上柱，石油醚-乙酸乙酯13:3、7:3、1:3混合溶剂梯度洗脱，收集目标洗脱液，减压浓缩得粗提物。取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按5:9:4:5混合，混合充分分层后，取上相注满高速逆流色谱柱，同时开转主机1000rpm，泵入下相做流动相，待系统平衡后，流速调节为3.5ml/min，同时用固定相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器监测，收集目标流分，连续制备，冷藏流分，得结晶物，经HPLC检测，纯度98.5%。