[发明专利]一种一锅法制备γ-谷氨酰小肽类化合物的方法

权利要求书

1.一种一锅法制备γ-谷氨酰小肽类化合物(1)的方法，其特征在于该方法包括下列步骤：

1)以5-羧乙基海因为起始物，与氨基酸在水相接肽试剂作用下进行水相接肽反应，形成5-羧乙基海因小肽类化合物，无需提取分离直接进行下一步酶反应；

2)步骤1)得到的5-羧乙基海因小肽类化合物，在弱碱性条件下，以同时含有海因酶与氨甲酰酶的菌体为催化剂，催化水解开环得到相应的γ-谷氨酰小肽类化合物。

2.根据权利要求1所述的一锅法制备γ-谷氨酰小肽类化合物的方法，其特征在于所述的γ-谷氨酰小肽类化合物(1)的R基团为甘氨酸、L-氨基酸、D-氨基酸、侧链保护L-氨基酸或侧链保护D-氨基酸的残基。

3.根据权利要求1所述的一锅法制备γ-谷氨酰小肽类化合物的方法，其特征在于步骤1)中，所述的水相接肽试剂为EDC·HCl/HOBt、EDC·HCl/HOOBt、EDC·HCl/HOAt和EDC·HCl/HOSu中的任意一种。

4.根据权利要求1所述的一锅法制备γ-谷氨酰小肽类化合物的方法，其特征在于步骤1)中，所述的水相接肽试剂与5-羧乙基海因的摩尔比为1～1.4∶1，氨基酸与5-羧乙基海因的摩尔比为1～1.6∶1。

5.根据权利要求1所述的一锅法制备γ-谷氨酰小肽类化合物的方法，其特征在于步骤1)中，所述的水相接肽反应为先将水相接肽试剂与5-羧乙基海因反应1～8h，再加入氨基酸反应10～18h。

6.根据权利要求1所述的一锅法制备γ-谷氨酰小肽类化合物的方法，其特征在于步骤2)中，所述的同时含有海因酶和氨甲酰酶的菌体为芽孢杆菌(Bacillus fordii)MH602或洋葱伯克霍尔德氏菌(Burkholderia cepecia)JS-02。

7.根据权利要求1所述的一锅法制备γ-谷氨酰小肽类化合物的方法，其特征在于步骤2)中，所述的弱碱性条件为pH7.5～9.5。

8.根据权利要求1所述的一锅法制备γ-谷氨酰小肽类化合物的方法，其特征在于步骤2)中，所述的菌体与5-羧乙基海因小肽类化合物的重量比为1∶0.5～8。

9.根据权利要求1所述的一锅法制备γ-谷氨酰小肽类化合物的方法，其特征在于步骤2)中，所述的催化水解开环反应温度为35～45℃，反应时间为10～24h。

10.根据权利要求2所述的一锅法制备γ-谷氨酰小肽类化合物的方法，其特征在于所述的L-氨基酸为L-丙氨酸、L-缬氨酸、L-亮氨酸、L-异亮氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-半胱氨酸、L-甲硫氨酸、L-天冬氨酸、L-谷氨酸、L-天冬酰胺、L-谷氨酰胺、L-赖氨酸、L-精氨酸、L-苯丙氨酸、L-酪氨酸、L-色氨酸、L-组氨酸和L-脯氨酸中的任意一种；

所述的D-氨基酸为D-丙氨酸、D-缬氨酸、D-亮氨酸、D-异亮氨酸、D-丝氨酸、D-苏氨酸、D-半胱氨酸、D-甲硫氨酸、D-天冬氨酸、D-谷氨酸、D-天冬酰胺、D-谷氨酰胺、D-赖氨酸、D-精氨酸、D-苯丙氨酸、D-酪氨酸、D-色氨酸、D-组氨酸和D-脯氨酸中的任意一种；

所述的侧链保护L-氨基酸为O-保护-L-丝氨酸、O-保护-L-苏氨酸、S-保护-L-半胱氨酸、N^ε-保护-L-赖氨酸、N^ω-保护-L-精氨酸、O-保护-L-酪氨酸和N^im-保护-L-组氨酸中的任意一种；

所述的侧链保护D-氨基酸为O-保护-D-丝氨酸、O-保护-D-苏氨酸、S-保护-D-半胱氨酸、N^ε-保护-D-赖氨酸、N^ω-保护-D-精氨酸、O-保护-D-酪氨酸和N^im-保护-D-组氨酸中的任意一种。