[发明专利]一种循环肿瘤细胞的富集、分析方法

权利要求书

1.一种循环肿瘤细胞的富集方法，其特征在于，主要包括以下步骤：

1)对生物体液样本进行红细胞裂解处理以去除红细胞；

2)加入与白细胞、红细胞和/或血小板特异性结合的免疫微珠进行孵育以去除白细胞、血小板及残余的红细胞；

3)将去除白细胞、红细胞后的细胞悬液在滤膜上进行过滤，得到富集循环肿瘤细胞的滤膜；

所述的免疫微珠上共价或非共价偶联有与白细胞、红细胞和/或血小板特异性结合的抗体；

所述的免疫微珠上偶联的抗体选自CD2、CD15、CD16、CD19、CD33、CD41、CD45、CD35、CD235a中的九种；

所述红细胞裂解液包括有以下浓度的组份：0.3M～0.32M氯化铵、0.018M～0.022M碳酸氢钾、0.003～0.005M乙二胺四乙酸或乙二胺四乙酸二钠，所述的红细胞裂解液还包括有0.01％～0.2％的甲醛。

2.根据权利要求1所述的循环肿瘤细胞的富集方法，其特征在于，所述滤膜孔径为5～8um，选自聚碳酸酯滤膜、纤维滤膜、尼龙滤膜、或塑料薄膜。

3.根据权利要求1所述的循环肿瘤细胞的富集方法，其特征在于，所述免疫微珠由抗体与微珠表面进行共价或非共价偶联而成，所述微珠的直径介于10纳米-100微米。

4.根据权利要求3所述的循环肿瘤细胞的富集方法，其特征在于，所述微珠为磁性或非磁性。

5.根据权利要求4所述的循环肿瘤细胞的富集方法，其特征在于，所述微珠含有聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯、和四氧化三铁中一种或以上的成分。

6.根据权利要求1至5任一所述的循环肿瘤细胞的富集方法，其特征在于，所述生物体液样本来源于人或动物的：外周循环血，胸腔积液，腹水，脐带血，羊水，骨髓，或培养的人或动物细胞。

7.一种用于富集循环肿瘤细胞的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括红细胞裂解液，免疫微珠；该试剂盒还包括滤膜；

所述的免疫微珠上共价或非共价偶联有与白细胞、红细胞和/或血小板特异性结合的抗体；所述的免疫微珠上偶联的抗体选自CD2、CD15、CD16、CD19、CD33、CD41、CD45、CD35、CD235a中的九种；

所述红细胞裂解液包括有以下浓度的组份：0.3M～0.32M氯化铵、0.018M～0.022M碳酸氢钾、0.003～0.005M乙二胺四乙酸或乙二胺四乙酸二钠，所述的红细胞裂解液还包括有0.01％～0.2％的甲醛。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述滤膜孔径为5～8um，选自聚碳酸酯滤膜、纤维滤膜、尼龙滤膜、或塑料薄膜。

9.一种用于富集循环肿瘤细胞的装置，包括用于加入红细胞裂解液的部件，用于加入免疫微珠的部件，以及过滤的部件。

10.一种细胞纯化试剂盒，其特征在于，主要组份包括有：与白细胞、红细胞和/或血小板特异性结合的免疫微珠，所述的免疫微珠上共价或非共价偶联有与白细胞、红细胞和/或血小板特异性结合的抗体；所述抗体选自CD2、CD15、CD16、CD19、CD33、CD41、CD45、CD35、CD235a中的九种。