[发明专利]一种齐考诺肽的固相合成方法

权利要求书

1.一种齐考诺肽的固相合成方法，其特征在于，所述方法包括如下顺序步骤：

(1)以Fmoc-氨基树脂为固相载体，从C端到N端依次缩合反应连接25个侧链保护的氨基酸，得到25个氨基酸的线性全保护肽树脂，其中，形成二硫键的三组Cys分别连接Trt、Acm或tBu保护基，同组的Cys连接相同保护基，不同组的Cys连接不同的保护基；

(2)将步骤(1)得到的线性全保护肽树脂进行线性切割，切割的同时脱去除Cys(Acm)和Cys(tBu)外的其它所有氨基酸的侧链保护基，得到含Cys(Acm)和Cys(tBu)的线性肽；

(3)氧化步骤(2)得到的线性肽形成第一对二硫键，得到单二硫环肽；

(4)脱除步骤(3)得到的单二硫环肽中Cys(Acm)的Acm保护基，同时环化形成第二对二硫键，得到双二硫环肽；

(5)脱除步骤(4)得到的双二硫环肽中Cys(tBu)的tBu保护基，同时环化形成第三对二硫键，得到三二硫环肽；

(6)步骤(5)得到的三二硫环肽经HPLC纯化、冻干得到齐考诺肽。

2.根据权利要求1所述的齐考诺肽的固相合成方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的氨基树脂为Rink Amide树脂、Rink Amide-MBHA树脂、Rink Amide-BHA树脂、Rink Amide-AM树脂、PAL树脂、Knorr树脂或Sieber树脂。

3.根据权利要求1所述的齐考诺肽的固相合成方法，其特征在于，步骤(1)中，以Fmoc-氨基树脂为固相载体，从C端到N端依次缩合反应连接如下25个侧链保护的氨基酸：Fmoc-Cys(Acm)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH，Fmoc-Cys(tBu)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Thr-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Cys(Acm)-OH，Fmoc-Asp(OtBu)-OH，Fmoc-Tyr(tBu)-OH，Fmoc-Met-OH，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-Cys(tBu)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Ala-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，得到的25个氨基酸的线性全保护肽树脂如下：

NH₂-Cys(Acm)-Lys(Boc)-Gly-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Cys(tBu)-Ser(tBu)-Gly–Thr-Cys(Trt)-Cys(Acm)-Asp(OtBu)-Tyr(tBu)-Met-Leu-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-Cys(tBu)-Lys(Boc)-Ala-Gly-Lys(Boc)-Gly-Lys(Boc)-Cys(Trt)-NH-Rink Amide MBHA树脂。

4.根据权利要求1或2或3所述的齐考诺肽的固相合成方法，其特征在于，步骤(1)中，从C端到N端依次缩合反应连接25个侧链保护的氨基酸，得到25个氨基酸的线性全保护肽树脂，方法为：按1∶(4～8)∶(4～8)的摩尔比分别称取溶胀后的氨基树脂、Fmoc保护氨基酸、偶联剂，将Fmoc保护氨基酸和偶联剂溶于二甲基甲酰胺，预活化，然后加入溶胀后并已经脱除Fmoc保护基的氨基树脂，室温震荡反应0.5～3小时连接Fmoc保护氨基酸，连接下一个氨基酸前用哌啶的N,N-二甲基甲酰胺溶液脱Fmoc保护基3次，时间分别为3～5分钟、3～5分钟、15～25分钟，每次连接一个氨基酸之后和脱除Fmoc保护基之后都需用二氯甲烷和二甲基甲酰胺交替洗涤3～10次，用量为5～10ml/g树脂；

其中，所述的偶联剂为DIC与组分A摩尔当量比为1：2的混合物，或组分A、组分B和组分C三者摩尔当量比为1:1:2的混合物，其中组分A为HOBt或HOAt，组分B为HBTU、HATU、TBTU或PyBOP，组分C为DIPEA或TMP。