[发明专利]快速分离扩增神经干细胞的培养基及方法

权利要求书

1.一种神经干细胞专用培养基，其基础成分与DMEM/F12培养基相同，其特征在于其pH值为6.9-7.1，并含有终浓度为5-30ng/ml的bFGF和EGF以及终浓度0.5-3%的维生素B27。

2.根据权利要求1所述的神经干细胞专用培养基，其特征在于其pH值为6.95-7.02，优选地，pH值为7.0。

3.根据权利要求1或2所述的神经干细胞专用培养基，其特征在于所述pH值通过添加碳酸氢钠获得。

4.根据权利要求1到4任一项所述的神经干细胞专用培养基，其特征在于所述bFGF和EGF的终浓度为20ng/ml，所述维生素B27的终浓度为1%。

5.一种神经干细胞的分离扩增方法，其包括步骤：

A）按常规方法获得神经干细胞的单细胞悬液；

B）将获得的单细胞悬液经不锈钢网过滤；

C）将DMEM/F12培养基pH值由呈酸性的pH5.9，经生理可耐受的碱性物质调节为中性或弱碱性；

D）分别加入终浓度为10-30ng/ml的bFGF和EGF，以及终浓度0.5-3%的维生素B27加入到DMEM/F12培养基中；

E）将0.5-1.5×10⁷/ml单细胞悬液加入到上述含有bFGF、EGF和B27，并且pH为中性或弱碱性的DMEM/F12培养基中，置于5%CO₂培养箱中于37℃潮湿环境中进行培养。

6.根据权利要求5所述的神经干细胞的分离扩增方法，其特征在于所述生理可耐受的碱性物质是碳酸氢钠。

7.根据权利要求5或6所述的神经干细胞的分离扩增方法，其特征在于所述中性或弱碱性为pH值6.9-7.1，优选地，pH值6.95-7.02，最优选地，pH值7.0。

8.根据权利要求5到7任一项所述的神经干细胞的分离扩增方法，其特征在于所述bFGF和EGF的终浓度为20ng/ml，所述维生素B27的终浓度为1%。

9.根据权利要求5到8任一项所述的神经干细胞的分离扩增方法，其特征在于获得单细胞悬液的方法可以是采用机械吹打或研磨的方法。

10.根据权利要求5到9任一项所述的神经干细胞的分离扩增方法，其特征在于所述的单细胞悬液过滤所采用的不锈钢筛网是80或200目。