[发明专利]一种同时检测乌鸡鸡肉中黑色素和肌苷酸含量的高效液相色谱方法

权利要求书

1.一种同时检测乌鸡鸡肉中黑色素和肌苷酸含量的高效液相色谱方法，其特征在于包括以下步骤：

（1) 鸡肉样品经胰蛋白酶、木瓜蛋白酶振荡酶解24 h，4000 rpm离心分层；取上清液用溶解液定容，得到肌苷酸待测溶液；

（2) 取经过步骤1酶解离心后的沉淀，用乙醚、无水乙醇、超纯水依次洗涤，去除脂类和杂质，得到黑色素粗品，再在碱性条件下经过氧化氢氧化为2,3,5-三羧酸吡咯，乙醚萃取，干燥，得到2,3,5-三羧酸吡咯晶体；

（3) 用步骤1的肌苷酸待测溶液溶解步骤2所得的2,3,5-三羧酸吡咯晶体，过滤膜；高效液相色谱仪上样检测，外标法定量。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2中，黑色素粗品的具体氧化

方法为：将黑色素粗品溶于10 mL l mol/L的碳酸钾溶液中，加入0.5 mL 质量浓度30%的H₂O₂，沸水中剧烈反应20 min；冷却后，加入0.6 mL质量浓度10%的亚硫酸钠终止反应，用6 mol/L盐酸调节pH值至1左右，再用40 mL乙醚萃取2次，合并萃取液，旋转蒸发干燥，得到浅棕色2,3,5-三羧酸吡咯晶体。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤3中，高效液相色谱条件为：色谱柱选用C18柱；流动相为pH值6.5的磷酸/三乙胺缓冲液和甲醇溶液，二者体积比95:5；流速为0.8 mL/min；柱温30℃；检测波长270 nm；进样量20 μL。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，样品中黑色素和肌苷酸含量的计算方法为：将乌鸡供试样品的峰面积分别代入2,3,5-三羧酸吡咯和肌苷酸标准曲线方程，计算得到2,3,5-三羧酸吡咯和肌苷酸含量；再根据2,3,5-三羧酸吡咯含量，以乌贼黑色素为对照品，通过双方换算因子，换算得到样品中的黑色素含量。