[发明专利]一种同时检测乌鸡鸡肉中黑色素和肌苷酸含量的高效液相色谱方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种联合、快速、准确检测乌鸡鸡肉中黑色素和肌苷酸含量的高效液相色谱方法，属于农业分析化学领域。

背景技术

我国是世界养鸡大国，据FAO统计资料，2011年全球鸡饲养量199.4亿只，中国的饲养量就达46.1亿只，占23.1%。基于地域、习俗等的不同，民间选育产生形态各异的地方鸡种，例如北京油鸡、惠阳胡须鸡、清远麻鸡、泰和丝羽乌骨鸡等等，成为祖先留给我们的珍贵遗传资源。其中，乌骨鸡也称乌鸡，具备乌皮、乌骨、乌肉等特征，历来是我国传统、特有的药食两用鸡种，《本草纲目》记载“其性甘、平、无毒，补虚劳嬴弱，治消渴，益产妇，治女人崩中带下，一切虚损诸病”。随着当前人们生活水平的提高，崇尚天然、养生保健的健康饮食理念日益受到重视，乌鸡作为滋补佳品正赢得人们青睐，市场份额稳中有升。

现代医学研究表明，黑色素(Melanin)是乌鸡滋阴补气、强身健体、抗衰防老功能的物质基础，它是一类与蛋白质结合牢固、不溶于水和几乎所有溶剂、理化性质比较稳定、呈无定形状态的吲哚类多聚体颗粒，药用价值很高。例如，胡泗才等(1999)发现乌骨鸡及其黑色素有提高小鼠红细胞过氧化氢酶活性的趋势，并能极为显著地延长雌性果蝇的平均寿命。辜清等(2000)给老年小鼠饲喂乌骨鸡及其黑色素，45天后发现小鼠肝、肠、肾中的琥珀酸脱氢酶、镁激活三磷酸腺苷酶、6-磷酸酶、5’核苷酸酶活性都增强。涂永刚等(2009)发现黑色素能够捕获自由基，具有抗氧化功能，可部分充当过氧化物歧化酶的作用，防止脂质过氧化。关于黑色素的测定方法，国内外一般采用重量法，虽然该方法操作比较简单，但不溶于水的杂质和结合蛋白会造成误差，而且该方法对黑色素结构破坏较大，不利于黑色素的进一步分析和利用。也有学者采用紫外-可见分光光度法(Ito等，1993)，同样存在杂质和结合蛋白的干扰影响。因此Ito等(1998)、孙亚真等(2008)研究采用了高效液相色谱方法(High performance liquid chromatography，HPLC)来检测黑色素含量，这主要是基于在碱性过氧化氢条件下，真黑色素(Eumelanin)所含的5,6-二羟基吲哚(DHI)和5,6-二羟基-2-吲哚羧酸(DHICA)这两种酪氨酸衍生物，分别被氧化成为2,3-二羧酸吡咯(PDCA)和2,3,5-三羧酸吡咯(PTCA)，进而可用液相色谱分析。其中，乌贼或乌鸡黑色素的PDCA和PTCA含量差异以数十倍计，因此可简单以PTCA含量作为乌鸡黑色素的判定依据。

研究已经发现，肌苷酸(Inosinic acid，IMP)又名次黄嘌呤核苷酸，是动物组织中非常重要的风味物质，它与肉类食品的鲜味密切相关，其增加鲜味的能力要比谷氨酸钠强几十倍。目前，肉中肌苷酸含量作为重要指标，已被广泛应用于各种动物肉类产品的品质评定，含量值的高低可间接反映出肉品风味的优劣。例如，陈国宏等(2000)测定表明不同鸡种间胸肌肌苷酸含量存在差异，其中，泰和乌骨鸡肌苷酸含量显著高于肖山鸡、狼山鸡、白耳鸡(♂)×肖山鸡(♀)、肖山鸡(♂)×白耳鸡(♀)。苏一军等(2003)比较了乌骨鸡、白耳黄鸡、罗曼蛋鸡等多个鸡种肌肉中肌苷酸的含量，发现无论是8周龄还是10周龄，乌骨鸡肌苷酸含量均显著高于其他鸡种。李慧芳等（2004）也得到同样结果，且发现随着周龄的增长，鸡肉肌苷酸含量呈增长趋势。关于肉中肌苷酸的测定方法，可有紫外分光光度法、毛细管电泳法、薄层层析法和高效液相色谱法等。紫外分光光度法只能实现粗略定量；毛细管电泳法同样存在分离度偏低、肌苷和腺苷单磷酸等相似物质干扰的问题；而薄层层析法操作复杂耗时、回收率低，目前已较少用于肌苷酸测定。采用高效液相色谱法则比较简单快速、测定精确(宋焕禄等，2002)。

乌鸡消费市场的持续拓展，不仅需要对传统乌鸡品种进行深入分析，还需要加大乌鸡新品系和杂交组合的研究开发力度，这些都对乌鸡功能性、风味性物质的检测提出了更高的要求。本专利采用先进的高效液相色谱方法，对黑色素和肌苷酸这两种具有代表性的肉质指标同时进行检测，通过优化操作步骤和色谱条件，突破了以往单一检测的局限，实现了联合、快速、准确检测。本方法不仅只需少量鸡肉样本即可检测两种指标，而且简化了实验操作步骤、节约了检测成本，有助于加快筛选功能、风味物质俱佳的优秀乌鸡品种。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于高效液相色谱技术的乌鸡鸡肉中黑色素和肌苷酸含量的联合检测方法。该方法简便快速、成本低廉、结果准确，解决了多个肉质指标分批检测的麻烦，有助于加快筛选功能性和风味物质含量俱佳的乌鸡个体，指导优质乌鸡肉质风味的目标选育。