[发明专利]一种串联质谱非衍生化法检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及化学分析检测技术领域，具体涉及一种串联质谱非衍生化法检测试剂盒。

背景技术

血中多种氨基酸和酰基肉碱是人体氨基酸、有机酸和脂肪酸代谢的标志产物，在代谢病的血中可发生氨基酸谱和酰基肉碱谱的改变，液相串联质谱联用技术(LC-MS/MS)已应用于新生儿遗传代谢病筛查和临床代谢性疾病的诊断。

串联质谱（MS/MS）即两个质谱仪串联后一次进行二级质谱检测,利用超敏性、高特异性、高选择性和快速检验的串联质谱技术，能在2～3min内对1个标本进行几十种代谢产物分析，通过对这些产物的分析，可以对40种左右遗传性代谢病(包括氨基酸代谢紊乱、有机酸代谢紊乱和脂肪酸代谢紊乱性疾病)进行筛查和诊断。

由于血中氨基酸种类很多，具有酸性、中性和碱性不同的化学性质。液相串联质谱联用同时检测多种氨基酸和多种酰基肉碱多需进行衍生化前处理。衍生化操作繁琐，耗时耗力，对环境有污染，衍生的产物并不能直接代表氨基酸本身，同样的问题也发生在肉碱和多种酰基肉碱的检测。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种串联质谱非衍生化法检测试剂盒，以解决现有LC-MS/MS检测中的缺陷。

为解决的上述技术问题，本发明公开了一种串联质谱非衍生化法检测试剂盒，其包含同位素标记氨基酸标准品混合物、同位素标记酰基肉碱标准品混合物、萃取液、流动相，其特征在于所述萃取液由甲醇、水、饱和一元羧酸组成，甲醇∶水∶饱和一元羧酸体积比为1000∶1～50∶0.01～2。

在一些实施例中，所述饱和一元羧酸为甲酸、乙酸、丙酸或丁酸，其中优选为甲酸。

在一些实施例中，所述流动相为80%甲醇、75%～80%乙腈或含1%甲酸的甲醇，其中优选为甲醇、水、饱和一元羧酸混合液，其中甲醇∶水∶饱和一元羧酸体积比为1000∶1～50∶0.01～2。

在一些实施例中，所述串联质谱非衍生化法检测试剂盒还包含U型底耐热96孔萃取板、V型底96孔检测板、粘性萃取板贴膜和检测板铝箔。

在一些实施例中，所述串联质谱非衍生化法检测试剂盒还包含氨基酸和酰基肉碱新生儿筛查质控品。

另一方面，本发明还公开了所述串联质谱非衍生化法检测试剂盒的使用方法，包括下列步骤：

1.内标液制备

A．使用1.0ml的萃取液加入氨基酸内标的冻干粉小瓶中，盖紧瓶盖，震荡，使其中的粉末完全溶解，溶解困难时，可置37℃烤箱中3分钟后，继续震荡，溶解至彻底。最好在使用前1天配置。

B．使用1.0ml的萃取液加入酰基肉碱内标的冻干粉小瓶中，盖紧瓶盖，震荡，使其中的粉末完全溶解。

C．内标液可在+2～+8℃冰箱保存30天。

2.工作液制备

A．将内标液置室温20分钟

B．以每孔100μl萃取液用量，计算当日测定样本和指控所需的萃取液总量。

C．以体积比108:1:1加入萃取液、氨基酸内标液和酰基肉碱内标液。例如测100个样本，配11ml含内标的萃取工作液。取10.8ml萃取液，分别加入0.1ml的氨基酸内标液和0.1ml的酰基肉碱内标液，即配成工作液。

D．工作液24小时稳定。

3.取样

将质控血片、样本血片在96孔板排序。用3.2mm打孔器顺序将血片打入U型底耐热96孔萃取板中。

4.样本萃取

将100μl含内标的萃取工作液分别加入96孔板的反应孔中，萃取样本。用粘性贴膜密封孔板。在45℃的孵育震荡器中，700rpm震荡45分钟。

5.样本上机检测

揭去密封膜。用移液器每孔移出80μl上清液，顺序置入洁净96孔板。用铝箔密封96孔板。放入质谱自动进样器托盘，供质谱检测，进样20ul，进样速度：0～0.2min为0.12ml/min，0.2～1.2min为0.015ml/min，1.2～1.5min为0.5ml/min。每份样本1.7min。采用串联质谱仪电喷雾阳离子方式。离子源温度120℃，解离温度350℃，喷雾电压3.5KV，氮气650l/h，锥孔气50l/h。多反应监测(MRM)模式收集数据。每个离子对0.05ms依次循环检测离子对，每份样本采集0.3-1.3min时间段的检测信号，叠加信号强度供定量。样本可保存约12小时供质谱检测。