[发明专利]一种将多肽稳定为alpha螺旋二级结构的方法

说明书

本发明提供了一种将多肽稳定为alpha螺旋二级结构的方法，其依次包括如下步骤：（1）将多肽的氨基端连接非天然氨基酸，并乙酰化封尾；（2）将步骤（1）的产物经过巯基‑烯反应获得硫醚侧链修饰的多肽化合物；（3）将硫醚侧链修饰的多肽化合物氧化，获得R型或者S型亚砜侧链修饰的多肽化合物；（4）将步骤（3）的产物分离纯化，获得R型亚砜侧链修饰的多肽化合物。通过CD证明了该方法利用手性亚砜侧链对稳定多肽的alpha螺旋二级结构效果很好，而且对多肽序列有良好的耐受性。

技术领域

本发明属于多肽结构稳定技术领域。更具体地说，本发明涉及一种通过构建侧链来稳定多肽alpha螺旋的方法以及由该方法构建的带有侧链修饰的多肽化合物。

背景技术

研究发现：在一个蛋白质中真正起到结合作用的往往只有很小的一段序列，而其他部分往往是为了达到这一序列的结构专一性而存在的。alpha-helix构象作为蛋白最重要的二级构象之一，在细胞生理过程起着至关重要的作用，如很多蛋白-蛋白相互作用的区域多为alpha螺旋构象。此外，使多肽具有稳定的alpha螺旋构象还能大幅提升多肽的抗蛋白降解能力和穿膜能力。

为了使多肽具有稳定的alpha螺旋构象，研究人员开发了各种各样的多肽构象稳定技术，如盐桥、金属螯合、HBS、构建共价侧链等。其中构建共价侧链是其中较为常用的方法，最早出现的是以酰胺键的形成作为侧链构建方法。此后二硫键，碳碳双键的形成等均被用于构建侧链以稳定多肽的alpha构象。

在侧链共价键的构建过程中偶联的侧链一般在alpha螺旋的同一面上，所以侧链偶联氨基酸的位置一般为i/i+3,i/i+4,i/i+7,i/i+11等。其中应用较多的是i/i+4与i/i+7。

但是每种稳定方法都有其一定的局限性，例如在酰胺键稳定技术中，由于酰胺键本身易水解所以在体内可能很容易被水解掉而无法发挥作用；以两个半胱氨酸为侧链形成基础的稳定技术中的侧链结构往往含有芳香基团，其对多肽本身的性质影响较大；基于叠氮与炔反应的侧链形成的三氮唑本身就是一个药效基团，其对多肽成药性影响可能更大。

所以至今为止并没有一种侧链技术是普适性的，故而需要开发多种多肽稳定技术以便于研发人员针对不同情况选择适合的技术。

发明内容

本发明的目的是提供一种通过构建新型的含有手性亚砜的侧链来稳定多肽的alpha螺旋的方法。

本发明的另一目的是提供一种具有稳定alpha螺旋结构的带有侧链修饰的多肽化合物及其制备方法。

进而，本发明提供了一种将多肽稳定为alpha螺旋二级结构的方法，它包括如下步骤：

(1)将多肽的氨基端连接非天然氨基酸，并乙酰化封尾；

(2)将步骤(1)的产物经过巯基-烯反应获得硫醚侧链修饰的多肽化合物；该硫醚侧链偶联氨基酸的位置为i/i+4；

(3)将硫醚侧链修饰的多肽化合物氧化，获得R型或者S型亚砜侧链修饰的多肽化合物；

(4)将步骤(3)的产物分离纯化，获得R型亚砜侧链修饰的多肽化合物。

在一优选例中，所述步骤(1)中的非天然氨基酸具有如下结构式：

其中R6为氢或亚甲基，n为1～6的正整数。